【摘 要】
：
原癌基因c-myc被鉴定为J亚群禽白血病病毒(ALV-J)诱导髓样细胞瘤的常见整合位点,其异常激活可能是ALV-J最重要的分子致病机制.为了鉴定c-myc反义RNA对c-myc基因表达的影响及其在ALV-J增殖中的作用,本研究通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术、PCR扩增5\'-race和3\'-race后对其编码属性的分析鉴定结果显示,鸡c-myc原癌基因反义RNA全长621 bp,且不编码蛋白;该反义RNA序列定位于鸡2号染色体,且源自c-myc外显子3反向序列,因此将其命名为ch-MY
【机 构】
：
扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所,江苏 扬州 225009;扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室,江苏 扬州 225009;扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学
论文部分内容阅读
原癌基因c-myc被鉴定为J亚群禽白血病病毒(ALV-J)诱导髓样细胞瘤的常见整合位点,其异常激活可能是ALV-J最重要的分子致病机制.为了鉴定c-myc反义RNA对c-myc基因表达的影响及其在ALV-J增殖中的作用,本研究通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术、PCR扩增5\'-race和3\'-race后对其编码属性的分析鉴定结果显示,鸡c-myc原癌基因反义RNA全长621 bp,且不编码蛋白;该反义RNA序列定位于鸡2号染色体,且源自c-myc外显子3反向序列,因此将其命名为ch-MYC-AS1.将ch-MYC-AS1连接载体pcDNA3.1,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ch-MYC-AS1,将其转染至鸡巨噬细胞细胞系HD11,培养48 h后利用荧光定量PCR和western blot检测ch-MYC-AS1过表达对c-myc表达的影响,结果显示,过表达ch-MYC-AS1可以显著抑制c-myc原癌基因在HD11中的表达.以MOI5的ALV-J(JS09GY3株)感染HD11细胞4h后,将pcDNA3.1-ch-MYC-AS1质粒转染该细胞,48h后采用IDEXX禽白血病抗原检测试剂盒检测细胞上清中ALV-Jp27蛋白的表达水平,结果显示过表达ch-MYC-S1显著减少细胞上清中ALV-J p27蛋白的表达;进一步通过荧光定量PCR、western blot检测过表达ch-MYC-AS1对ALV-J复制的影响,结果显示,ALV-J env基因mRNA转录水平和蛋白表达水平在ch-MYC-AS1转染后48 h的HD11细胞中均显著下调(P＜0.01);利用间接免疫荧光技术检测DF-1细胞上清中ALV-J的病毒效价,结果显示:与对照组相比,HD11细胞上清中ALV-J的病毒效价在ch-MYC-AS1转染后48 h明显降低.上述结果表明过表达ch-MYC-AS1可以显著抑制ALV-J在HD11细胞中的增殖.本研究首次揭示了原癌基因c-myc反义RNA的抗病毒功能,为进一步探究c-myc基因在ALV-J致病机理中的作用提供了参考依据.
其他文献
煤制乙二醇工艺过程中,需要测定生产过程中的无机气体成分,对工艺生产作出指导.采用气相色谱法,通过一个十通阀和一个六通阀,HN填充柱与毛细管色谱柱HP-MOLESIEVE组合,经过多次实验探究优化,最终确立了高纯氩气为载气,配备恒温外置小柱箱,柱箱采用程序升温,最优的切换十通阀、六通阀时间,实现了一次性测定样品气中二氧化碳、氢气、氧气、氮气、一氧化氮、甲烷、一氧化碳的方法.经过验证,方法中所有组分R S D都在1％ 以内,加标回收率都在98.0％ ～101％,能够快速准确地为工艺生产提供可靠的分析数据.
化学反应法是通过对化学物质本身较为复杂性的特点进行探讨、分析,其技术涵盖了化学学科所有领域,而毒品的检验分析工作与化学反应法密切相关,在仪器分析的时期,化学物质的分析主要通过化学显色法、分子光谱法、色谱法与质谱法联合等技术,其中毒品检验分析中毛细管电泳仪器分析的方法是使用率最高的化学反应法,毒品的检验与初次筛选则更多采用了化学分析法.
在当代社会,无机化学工业的发现十分重要,无论是各种企业能源的利用方面,还是在国家重要资源的开采工作中,都离不开化学工厂企业,因此,做好企业的管理工作十分重要.其中会计档案工作的有效平稳运行成为影响企业运行状态的重要环节之一,在实际工作中,相关工作人员需要根据企业的发现需求和政策的变化,随时调整企业会计档案管理工作的流程和重点,以便于更好地顺应变化,同时也可以达到有效提高档案管理工作质量的目的,为化学工厂企业的发展创造更加有利的环境和条件.
单核细胞增生李斯特菌(Lm)是主要的食源性致病菌之一,也是一种重要的人畜共患病原菌,感染人和动物后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多症等.为建立快速检测Lm的方法,本研究以Lm毒力因子actA作为特异性检测的靶基因,通过条件优化初步建立了快速检测食源性Lm的环介导等温扩增(LAMP)方法.并采用该方法进行了特异性、敏感性及临床样品检测试验.结果显示,利用建立的LAMP方法检测Lm、肠出血性大肠杆菌O157∶H7、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森菌、产气荚膜梭菌、空肠弯曲菌、胸膜肺炎放线
为了探究potA基因对猪链球菌2型(SS2)生物学特性和致病性的影响,本研究利用同源重组系统构建potA基因缺失突变株(△potA),并经PCR和western blot鉴定.采用显微镜观察、生长曲线测定和平板计数等方法比较△potA和野生SC-19菌株的细胞形态和生长速率.结果显示,相比于SC-19菌株,△potA菌株的链长极显著增长(P＜0.001),生长速率下降,表明potA基因的缺失影响了 SS2的正常生长;将不同浓度的△potA和SC-19菌株分别感染小鼠,比较小鼠的存活率,利用平板计数法检测小
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由 ASF 病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种高度接触性传染病,不同日龄的猪均易感.急性型ASF临床表现为高热、皮肤发绀和各脏器出血,病死率可高达100％,对全球养猪业造成重大的经济损失[11.世界动物卫生组织(OIE)将ASF列为法定报告动物疫病,我国将其列为一类动物疫病[2].2018年8月,辽宁省沈阳市暴发了我国首例ASF疫情,随后蔓延至我国各省[3].由于目前尚无商品化的疫苗及治疗药物,所以ASF的防控主要依靠检疫、扑杀以及严格的生
为了研究锡兰钩虫鞘脂激活蛋白样蛋白(Ace-SLP-1)的免疫学特性,本研究以锡兰钩虫成虫cDNA为模板,根据GenBank中Ace-SLP-1基因序列(DQ855414.1)设计特异性引物,采用RT-PCR扩增Ace-SLP-1基因,结果显示,PCR扩增了Ace-SLP-1基因,其ORF全长315bp,编码104个氨基酸;利用在线软件对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果显示该蛋白为疏水蛋白,前17个氨基酸为信号肽序列且有跨膜结构域等;根据Ace-SLP-1基因编码氨基酸序列信息将其成熟肽编码
为筛选表达量高且免疫原性强的红斑丹毒丝菌表面保护性抗原A(SpaA)的抗原片段,本研究根据该菌SpaA的结构和功能区将其设计为6个子片段和1个全长片段,采用PCR技术从红斑丹毒丝菌HG-1菌株中扩增出SpaA的7个抗原基因片段,利用原核表达系统克隆并表达后采用SDS-PAGE和western blot检测表达及纯化情况.结果显示,获得7个重组蛋白,分别命名为rSpaA1～rSpaA7,其表达量占菌体总蛋白的17.44％～25.38％,其中rSpaA1、rSpaA2、rSpaA5以包涵体形式表达,rSpaA
为了研究单核细胞增生李斯特菌(Lm)RsbS蛋白的抗应激机制,本研究设计针对rsbS基因完整ORF的引物,PCR扩增rsbS基因,构建重组表达质粒pET-30a-rsbS,转化至表达菌株Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导培养后SDS-PAGE检测,结果显示获得18.8 ku带His标签的重组RsbS蛋白,利用His-Ni纯化柱纯化重组RsbS蛋白,得到浓度约1 μg/mL的纯化蛋白.以纯化的重组RsbS蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,经间接ELISA测定抗体效价为1∶128 000;经western
为获得肠炎沙门氏菌SEF14菌毛蛋白并检测其生物学功能,本研究以肠炎沙门氏菌标准株SE50336为模板,PCR扩增其含分泌信号肽的sef14操纵子基因片段,并克隆至表达载体pBR322中,构建重组质粒pBR322-sef14,将该重组质粒转化至经修饰且不含任何菌毛的大肠杆菌SE5000M株中,获得重组菌pBR322-sef14/SE5000M.将重组菌pBR322-sef14/SE5000M与本实验室制备的SefA(SEF14菌毛的主要亚基)单克隆抗体(MAb)凝集;利用透射电镜和免疫电镜观察上述重组菌并