鼠伤寒沙门菌Ssek3基因的序列特征分析与表达纯化

• 作 者: 杜付玉 廖成水 杨亚东 王晓利 郁川 李银聚 程相朝 张春杰
• 机 构: 471023 洛阳，河南科技大学动物科技学院，洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室,471023 洛阳，河南科技大学动物科技学院，洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室,471023 洛
• 出 处: 中华微生物学和免疫学杂志
• 发表日期: 2017年37期
• 关键词: 鼠伤寒沙门菌 Ssek3基因 克隆 原核表达 生物信息学分析

目的

研究鼠伤寒沙门菌Ssek3基因的序列结构特征及蛋白表达纯化。

方法

从鼠伤寒沙门菌SL1344株获得Ssek3基因的序列，利用生物信息学方法进行系统性分析，并进行原核表达及纯化。

结果

软件预测分析结果显示，SseK3蛋白由335个氨基酸，72个氨基酸残基组成，蛋白质理论相对分子质量(M_r)为37.89×10³，分子式为C₁₇₀₀ H₂₆₂₉ N₄₆₃O₄₉₇S₁₂，等电点为6.7，属于稳定存在的亲水蛋白质。该蛋白质无信号肽也无跨膜区，属于膜内蛋白，含有5个N-糖基化位点、3个O-糖基化位点、33个磷酸化位点、22个B细胞线性结合位点和11个T细胞结合位点以及21个二硫键位点。二级结构中，α-螺旋(Hh)占34.03%(114个)，伸展链(Ee)占21.49%(72个)，β-折叠(Tt)占8.96%(30个)，无规则卷曲(Cc)占35.52%(119个)。实验结果显示，Ssek3基因大小为1 008 bp，SDS-PAGE分析显示，Ssek3基因在原核表达系统中以分泌蛋白形式存在，表达的融合蛋白大小(M_r)约为40×10³。

结论

本研究成功克隆了鼠伤寒沙门菌Ssek3基因，对其进行序列分析和原核表达，为深入探究Ssek3蛋白在鼠伤寒沙门菌感染宿主细胞中的作用提供资料。