【摘 要】
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目的:研究脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的分离、培养和鉴定的方法,为组织工程、细胞疗法、基因疗法提供可靠的细胞来源。方法:采用反复贴壁法从小鼠脂肪组
【机 构】
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苏州大学附属儿童医院呼吸科,苏州大学附属儿童医院外科,苏州大学附属儿童医院实验室
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目的:研究脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的分离、培养和鉴定的方法,为组织工程、细胞疗法、基因疗法提供可靠的细胞来源。方法:采用反复贴壁法从小鼠脂肪组织中分离、纯化脂肪干细胞,观察其细胞形态,MTT法测定其生长曲线,流式细胞仪对干细胞表面标志物进行鉴定,采用不同诱导液对脂肪干细胞进行诱导,鉴定其多系分化能力。结果:接种后第2 d,大多数呈纺锤形,少数呈三角形、多角形等形状。至第5 d左右,呈成纤维细胞样梭形细胞。至第9~10 d,细胞呈均一的梭形;传代细胞形态与原代细胞类似,但生长速度加快,生长曲线为"S"形曲线。经测定CD90阳性细胞达到96.6%;CD44阳性细胞数达到85.3%;CD11b、CD45阳性细胞均为0.5%。经油红O染色检测,诱导的干细胞胞质中的脂滴被染为红色;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色表现为细胞内灰黑色或黑色颗粒,Von Kossa染色表现为细胞内可见黑色的矿化结节;用阿尔新蓝染色检测,将软骨结节样结构染成蓝色。结论:反复贴壁法可以从小鼠脂肪组织中分离出ADSCs,具备干细胞的各项特征,为干细胞的临床应用提供丰富的干细胞来源。
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