微小RNA-494介导人成纤维细胞生长因子受体2调控骨肉瘤细胞侵袭和迁移的机制

• 作 者: 李勇 龚泰芳 孙景东 李彬彬 李治峰 蔡林
• 机 构: 430071 武汉大学中南医院骨科；442099 湖北省十堰市太和医院 湖北医药学院附属医院骨科,442099 湖北省十堰市太和医院 湖北医药学院附属医院骨科,442099 湖北省十堰市太和医院 湖北
• 出 处: 中华实验外科杂志
• 发表日期: 2018年35期
• 关键词: 骨肉瘤 微小RNA 侵袭 转移 成纤维细胞生长因子受体2

目的

探讨微小RNA(miRNA，miR)-494介导成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)调控骨肉瘤细胞侵袭和迁移的机制。

方法

瞬时转染法上调或下调骨肉瘤143B细胞的miR-494水平，噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力，Transwell检测细胞侵袭能力，划痕实验检测各组细胞迁移能力，Western blot检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平。采用生物信息学软件Targetscan预测miR-494靶基因，并采用双荧光素酶报告实验验证其直接靶作用关系。建立骨肉瘤原位荷瘤裸鼠模型，给予miR-494 agomir处理，观察上调miR-494对荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用。

结果

miR-494上调组24、48、72 h的细胞吸光度(A)值(0.092±0.014、0.135±0.024、0.323±0.051)分别低于对照组(0.142±0.034、0.247±0.028、0.511±0.042，t＝3.261，P＝0.025；t＝3.512，P＝0.013；t＝3.992，P＝30.007)。miR-494下调组24、48、72 h的细胞A值(0.155±0.012、0.356±0.024、0.746±0.095)分别高于对照组(0.086±0.007、0.218±0.028、0.557±0.039，t＝3.026，P＝0.039；t＝3.925，P＝0.008；t＝4.261，P＝0.001)。瞬时转染24 h后，miR-494上调组细胞跨膜数目(48.3±11.4)少于对照组(87.4±14.6，t＝2.336，P＝0.016)，而miR-494下调组细胞跨膜数目(128.3±20.4)多于对照组(88.7±14.6，t＝2.567，P＝0.012)。miR-494上调组细胞迁移率[(52.6±8.7)%]低于对照组[(76.8±9.3)%，t＝3.261，P＝0.015]，而miR-494下调组细胞迁移率[(87.6±7.6)%]高于对照组[(78.3±8.2)%，t＝2.428，P＝0.032]。miR-494上调组细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达水平低于对照组，而miR-494下调组细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达水平高于对照组。FGFR2野生型与miR-494模拟物共转染组荧光素酶活性显著低于对照组，上调miR-494能抑制骨肉瘤143B细胞FGFR2的mRNA水平，而下调miR-494可促进骨肉瘤143B细胞FGFR2的mRNA水平。miR-494 agomir(494-agomir)给药组裸鼠肿瘤体积在给药后14、21、28 d[(237.9±23.8)、(449.3±26.8)、(726.9±58.7) mm³]分别低于对照组[(356.8±42.3)、(678.4±46.3)、(1 242.6±59.4) mm³，t＝2.326，P＝0.025；t＝3.126，P＝0.004；t＝3.659，P＝0.001]。

结论

miR-494可抑制骨肉瘤143B细胞增殖、侵袭和迁移能力，其机制与调控靶基因FGFR2密切相关。