【摘 要】
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目的:探讨珠子参皂苷对胃癌细胞HGC-27抑制作用及可能的机制.方法:采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测珠子参皂苷10、20、40、60、80、100、120 μg/mL对肿瘤细胞(HGC-27、A549、MCF-7)和正常细胞(MCF10a、HL-7702)增殖的影响;划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移、侵袭能力,平板克隆和Hoechst 33258染色试验检测细胞增殖和凋亡,流式细胞术检测线粒体活性,双荧光素酶报告试验证实miR-10a靶向抑制磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(P
【机 构】
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三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室&药食同源大健康产品开发利用宜昌市重点实验室,生物与制药学院,宜昌 443002;三峡大学医学院,宜昌 443002;三峡大学中医临床医学院,宜昌443002
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目的:探讨珠子参皂苷对胃癌细胞HGC-27抑制作用及可能的机制.方法:采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测珠子参皂苷10、20、40、60、80、100、120 μg/mL对肿瘤细胞(HGC-27、A549、MCF-7)和正常细胞(MCF10a、HL-7702)增殖的影响;划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移、侵袭能力,平板克隆和Hoechst 33258染色试验检测细胞增殖和凋亡,流式细胞术检测线粒体活性,双荧光素酶报告试验证实miR-10a靶向抑制磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(Pik3ca)的表达;Real-time PCR法检测miR-10a、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad mRNA表达,Western blot法检测p-PIK3CA、PIK3CA、p-AKT、AKT、非甾体类抗炎药相关基因-1(NAG-1)、BCL-2、BCL-XL、BAX、BAD、细胞色素c(Cytochrome c)、pro-Caspase-3、pro-Caspase-9、Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达.结果:珠子参皂苷对HGC-27细胞的增殖具有较强抑制作用(IC50 =29.77 μg/mL),呈浓度依赖性显著抑制HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭,明显降低线粒体活性、增加LDH释放率、诱导细胞凋亡(P＜0.05或P＜0.01),证实miR-10a可靶向抑制Pik3ca表达,珠子参12.5、25、50 μg,/mL可上调miR-10a、Bax、Bad mRNA表达,下调Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达,上调Cytochrome c、Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Apaf-1、AIF蛋白表达和增加BAX/BCL-2、BAD/BCL-XL蛋白及基因比率,下调NAG-1、pro-Caspase-3、pro-Caspase-9、XIAP蛋白表达和降低p-PIK3CA/PIK3CA、p-AKT/AKT比率.结论:珠子参皂苷能够抑制HGC-27胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡,其机制可能与上调miR-10a表达、抑制PI3K/AKT/NAG-1信号通路激活,进而参与调控BCL-2及Caspase家族途径有关.
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