【摘 要】
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目的探讨PARP-1介导的自噬流受阻在大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用。方法采用大鼠心肌细胞H9c2制备缺血再灌注细胞模型。实验分为对照组、缺氧/复氧处理模型组、PARP-
【基金项目】
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广东省自然科学基金(2017A030313627);广东省医学科研基金(A20162234);南方医科大学青年科技人员培育项目(C1034379)
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目的探讨PARP-1介导的自噬流受阻在大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用。方法采用大鼠心肌细胞H9c2制备缺血再灌注细胞模型。实验分为对照组、缺氧/复氧处理模型组、PARP-1抑制剂组、PARP-1抑制剂+模型组(PJ34+H/R组)。取各组处理后的6孔板H9c2细胞提取总蛋白后Western blot分别检测PARP-1活性蛋白p ADPr,凋亡相关蛋白Bax,细胞DNA损伤标记蛋白p-γH2ax的表达,细胞自噬流相关蛋白:LC3BII/LC3I、Beclin-1、P62的表达量。通过Graph Pad Prism 6统计软件对数据进行分析,比较各组间差异。结果与对照组比较,MIRI模型组PARP-1活性标记物p ADPr表达更高表示PARP-1激活增多,细胞凋亡损伤增加,DNA损伤(p-γH2ax)也增多(P<0.05)。LC3B II、beclin-1表达增高,同时p62表达也增高(P<0.05),表示自噬流受阻。与模型组比较,加入PARP-1抑制剂后(H/R+PJ34组)可明显抑制心肌细胞内PARP-1活性(p ADPr),细胞凋亡减少,细胞DNA损伤也减轻(P<0.05);自噬相关蛋白LC3B II、beclin-1表达无明显变化,而p62表达降低(P<0.05),表明自噬流受阻情况得到缓解(P<0.05)。结论 PARP-1激活介导的自噬流受阻在大鼠MIRI中发挥着作用,通过抑制PARP-1活性后可明显逆转自噬流受阻情况,减轻MIRI。
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