【摘 要】
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[目的]研究小檗碱单体是否通过靶向微小RNA-515-5p(miR-515-5p)来影响结直肠癌细胞的增殖与凋亡.[方法]小檗碱作用结直肠癌细胞Caco-2后,采用实时定量PCR(qRT PCR)检测细胞周
【机 构】
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安康市中医医院肛肠科,陕西安康725000
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[目的]研究小檗碱单体是否通过靶向微小RNA-515-5p(miR-515-5p)来影响结直肠癌细胞的增殖与凋亡.[方法]小檗碱作用结直肠癌细胞Caco-2后,采用实时定量PCR(qRT PCR)检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)mRNA和miR-515-5p的表达,MTT法检测细胞增殖,Western Blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡.通过脂质体法转染miR-515-5p模拟物或抑制剂于细胞Caco-2,分别采用Western Blot、MTT、流式细胞仪检测高表达或低表达miR-515-5p后CyclinD1、Cleaved-caspase-3蛋白表达、细胞增殖和凋亡情况.在细胞中转染miR-515-5p抑制剂,并给予小檗碱处理,采用上述方法检测细胞Caco-2增殖和凋亡等的变化.[结果]20、40、80 μmol/L小檗碱显著减少了Caco-2细胞内CyclinDl mRNA表达量和细胞存活率(P＜0.05).40 μmol/L小檗碱明显增加Cleaved-caspase-3蛋白表达量、细胞凋亡率和miR-515-5p表达量.高表达miR-515-5p明显降低Caco-2细胞的细胞存活率、CyclinD1蛋白水平,并显著提高了Cleaved-caspase-3蛋白的表达量、细胞凋亡率.低表达miR-515-5p时的结果相反.低表达miR-515-5p后,小檗碱对Caco-2细胞增殖、CyclinD1蛋白表达的抑制作用和对细胞凋亡、Cleaved caspase 3蛋白表达的促进作用被逆转.[结论]小檗碱通过靶向miR-515-5p基因,抑制结直肠癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.
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