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目的：对重症加强治疗病房（ICU）腹泻患者的粪便标本进行艰难梭菌检测，了解本院ICU腹泻患者艰难梭菌的感染情况。方法采用前瞻性观察性研究方法，选择2013年6月至2014年7月入住浙江省嘉兴学院附属第二医院ICU的腹泻患者25例，每例患者收集2份粪便标本，一份行厌氧培养，另一份采用定量聚合酶链反应（PCR）及凝胶电泳进行毒素基因检测。结果25份粪便标本经厌氧培养，其中6份粪便标本培养出艰难梭菌（24%），药敏结果提示对甲硝唑及万古霉素均敏感。艰难梭菌毒素检测显示，25份粪便标本直接提取DNA后进行PCR扩增，5份标本粪便艰难梭菌毒素A/B检测为阳性，且均为毒素B阳性（20%）。两种方法检测艰难梭菌阳性率差异无统计学意义（χ2＝0.13，P＞0.05）。5例毒素检测阳性患者均治愈。结论本院ICU艰难梭菌相关性腹泻比较严重，对于临床疑诊患者应及时进行艰难梭菌检测以指导治疗。