菊粉外切酶的异源表达、纯化及酶学性质

• 作 者: 马俊 安启坤 唐文竹
• 机 构: 大连工业大学生物工程学院
• 出 处: 食品与发酵工业
• 发表日期: 0年期
• 关键词: 菊粉外切酶 表达 纯化 酶学性质
• 基金项目: 辽宁省高等学校基本科研项目(No.2017J030)

将菊粉降解菌Paenibacillus sp.Lfos16的菊粉外切酶基因克隆至表达载体pET-28a（+）,转入E.coli BL21（DE3）中实现了异源表达。利用镍柱亲和层析纯化重组菊粉外切酶,并进行SDS-PAGE检测。重组菊粉外切酶的表观分子质量为87 kDa,经纯化后,重组菊粉外切酶的比酶活为348.30 U/mg。重组菊粉外切酶作用菊粉和蔗糖的酶活分别为259.37 U/mL和592.16 U/mL,I/S值为0.438,且TLC检测发现重组酶水解菊粉的主要产物为果糖。初步探究了重组菊粉外切酶的酶学性质,结果表明:重组菊粉外切酶最适作用温度为40℃,且当温度低于30℃时酶活较稳定;最适作用pH为6,且当pH在6.6～7.6时保持较高酶活;Ag⁺、Cu²⁺、Mn²⁺、Zn²⁺、Hg²⁺、Fe³⁺具有显著抑制作用。重组菊粉外切酶对菊粉的K_m为19.28 mg/mL,V_max为0.18 mg/（min·mL）。