【摘 要】
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目的研究跨膜型TNF-α(TM-TNFα)的细胞毒作用与其功能域的关系.方法通过重组PCR对TM-TNFα基因进行定点突变,并在微粒体膜的存在下体外转录、翻译获得跨膜表达的TM-TNFα,检
【机 构】
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武汉华中科技大学同济医学院免疫学教研室
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目的研究跨膜型TNF-α(TM-TNFα)的细胞毒作用与其功能域的关系.方法通过重组PCR对TM-TNFα基因进行定点突变,并在微粒体膜的存在下体外转录、翻译获得跨膜表达的TM-TNFα,检测这些突变体的胞毒作用.结果通过重组PCR分别获得TM-TNFα第-71、31、35、87、95、143与147位氨基酸点突变的cDNA,相应的TM-TNFα对L929细胞系的细胞毒作用,与野生型TM-TNFα相比,第-71、143位氨基酸单个置换使TM-TNFα胞毒作用下降4倍以上,35、95、147位单个置换使TM-TNFα胞毒作用下降1.5～2.5倍;而第31、87位氨基酸置换则对TM-TNFα杀伤作用无影响.结论TM-TNFα胞内段的氨基酸参与其细胞毒作用;除-71位氨基酸外,其余6个位点的氨基酸所在区域均参与分泌型TNF-α(S-TNFα)的细胞毒作用,因此TM-TNFα和S-TNFα发挥细胞毒作用的功能域可能不完全相同.
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