复方血栓通对猴脉络膜-视网膜内皮细胞增生、移行和管腔形成的作用

• 作 者: 罗旭昇 吴星伟 顾青 张红梅 施宇华 仇亚婷
• 机 构: 中国中医科学院眼科医院眼科,200080上海，上海交通大学附属第一人民医院眼科,200080上海，上海交通大学附属第一人民医院眼科,200080上海，上海交通大学附属第一人民医院眼科,200080上海
• 出 处: 中华眼视光学与视觉科学杂志
• 发表日期: 2011年13期
• 关键词: 复方血栓通 中草药 血管生成抑制剂 脉络膜新生血管 基质金属蛋白酶类 血管内皮生长因子类 细胞增生 细胞移行 Complex Xueshuantong drug

目的 探讨复方血栓通干预猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)参与血管生成的作用及机理。方法 实验研究。本研究分为四部分：①取对数生长期RF/6A细胞进行培养，设立空白对照组、阳性对照组以及不同浓度的复方血栓通观察组，每组均加入终浓度为10 ng/ml的血管内皮生长因子(VEGF)，阳性对照组加入终浓度0.20 mg/ml的硫酸鱼精蛋白，复方血栓通观察组设立0.39～50.00 mg/ml的多个不同浓度组。培养24h后采用酶联免疫检测仪测定各组吸光度A值，观察不同浓度的复方血栓通对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖的影响。②设立空白对照组和终浓度为3.13、6.25、12.50 mg/ml的复方血栓通组，培养24h后检测不同浓度复方血栓通对RF/6A细胞移行的影响。③设立空白对照组和终浓度为0.39、0.78、1.56 mg/ml的复方血栓通组，培养12 h后检测不同浓度的复方血栓通对RF/6A细胞管腔形成的影响；④设立空白对照组、终浓度为0.20 mg/ml的硫酸鱼精蛋白阳性对照组和终浓度为1.56、3.13、6.25 mg/ml的复方血栓通组，培养24h后，运用Western Blot和实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法，分别检测不同浓度的复方血栓通对RF/6A细胞表达VEGF、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白和mRNA的影响。对多组计量资料进行单因素方差分析。结果 ①各组间A值差异有统计学意义(F=158.669，P＜0.01)，同空白对照组比较，0.78～25.00 mg/ml浓度的复方血栓通对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖具有明显抑制作用（P均＜0.01）；②复方血栓通浓度为0、3.13、6.25和12.50 mg/ml时，RF/6A细胞移行数分别为123.3±13.8、114.3±15.5、54.0±6.1和40.3±10.1，组间差异有统计学意义(F=36.918，P＜0.01)；与空白对照组比较，6.25和12.50 mg/ml浓度的复方血栓通对RF/6A细胞移行具有明显的抑制作用（P均＜0.01）；③复方血栓通浓度为0、0.39、0.78和1.56 mg/ml时RF/6A细胞内皮管腔形成数分别为20.3±2.5、12.7±2.1、9.7±1.2和0.7±0.6，组间差异有统计学意义(F=64.324，P＜0.01)；与空白对照组比较，0.39、0.78和1.56 mg/ml浓度的复方血栓通对RF/6A细胞内皮管腔形成均具有明显的抑制作用（P均＜0.01），且抑制作用随浓度增加而增强；④空白对照组、阳性对照组以及1.56、3.13和6.25 mg/ml浓度的复方血栓通组VEGF和MMP-2蛋白相对含量组间差异均有统计学意义(F=343.346、1670.505，P均＜0.01)；与空白对照组比较，其余各组均具有显著抑制RF/6A细胞VEGF和MMP-2蛋白表达的作用（P均＜0.01），复方血栓通的抑制作用随浓度增加而增强；各组VEGF和MMP-2 mRNA相对含量的差异也有统计学意义(F=228.130，208.579，P均＜0.01)，与空白对照组比较，其余各组均具有显著抑制RF/6A细胞VEGF mRNA表达的作用（P均＜0.01），复方血栓通的抑制作用随浓度增加而增强。结论 复方血栓通可能通过抑制RF/6A细胞增殖、移行以及管腔形成来抑制其参与新生血管生成，其机理可能与抑制RF/6A细胞VEGF、MMP-2的表达有关。