【摘 要】
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目的 探讨MDA-5在同型半胱氨酸(Hcy)致巨噬细胞炎症反应中的作用及机制.方法 巨噬细胞用Hcy干预24 h,ELISA检测TNF-α和IL-6含量;荧光定量PCR和western-blot检测MDA-5、DNA甲
【机 构】
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银川市第二人民医院心内科,宁夏银川750011;国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室,宁夏银川750004;宁夏医科大学基础医学院,宁夏银川750004;国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病
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目的 探讨MDA-5在同型半胱氨酸(Hcy)致巨噬细胞炎症反应中的作用及机制.方法 巨噬细胞用Hcy干预24 h,ELISA检测TNF-α和IL-6含量;荧光定量PCR和western-blot检测MDA-5、DNA甲基转移酶(DNMTs)的mRNA和蛋白表达;巢式降落式甲基化特异性PCR检测MDA-5启动子区甲基化水平;将MDA-5重组腺病毒(Ad-MDA-5)和干扰片段(si-MDA-5)转染巨噬细胞检测细胞内TNF-α和IL-6含量.结果 Hcy干预细胞后,细胞内TNF-α 和 IL-6含量分别增加了 37.5％(t=2.243 0,P=0.035 4)和25％(t=2.464,P=0.031 4),MDA-5的 mRNA 和蛋白表达也分别增加了 52.5％(t=3.522,P=0.012 5)和41.3％(t=3.183,P=0.019 0),而MDA-5启动子区甲基化水平降低了 30.1％(t=3.377,P=0.027 9),DNMT3a 表达降低了 32.7％(t=3.258,P=0.031 1);过表达 MDA-5后,细胞内TNF-α 和IL-6含量比 Hcy 组分别增加了 60.1％(t=2.625,P=0.0393)和64.6％(t=8.867,P=0.000 1),而干扰 MDA-5的表达,TNF-α 和 IL-6含量分别比 Hcy 组降低了 13.6％(t=4.188,P=0.005 8)和23.6％(t=3.958,P=0.007 2).结论 MDA-5 DNA低甲基化介导了 Hcy诱导的巨噬细胞炎症反应.
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