【摘 要】
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目的 研究与宫颈癌及人类其它多种组织癌症密切相关的人乳头瘤病毒16型(HPV16)的晚期基因L1的表达及其生物学活性。方法 采用PCR法从pBSSK-B/16L1扩增了来自中国妇女鲍温病组
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目的 研究与宫颈癌及人类其它多种组织癌症密切相关的人乳头瘤病毒16型(HPV16)的晚期基因L1的表达及其生物学活性。方法 采用PCR法从pBSSK-B/16L1扩增了来自中国妇女鲍温病组织标本的HPV16晚期基因L1,装入杆状病毒转移载体;在DH10Bac内通过转座子Tn7的介导,使携带有杆状病毒多角体蛋白基因启动子Ppolh的HPV16L1基因整合入杆状病毒,形成重组杆状病毒;转染昆虫细胞Sf9进行表达;将感染72?h的Sf9细胞包埋、切片、染色后,电镜观察。提取L1蛋白,免疫BALB/c小鼠。结果 重组杆状病毒在Sf9细胞内高效表达出L1蛋白,经Westernblot发现能与L1抗体特异地结合;薄层扫描显示所表达的L1蛋白占Sf9细胞总蛋白的比例高达31%。经透射电镜观察表明,在细胞核里有大量的重组杆状病毒形成;并且产生了大量的由HPV16L1蛋白单体自组装的病毒样颗粒(virus-likeparticles,VLP)。小鼠免疫实验结果表明,所表达的HPV16L1蛋白具有强免疫原性。结论 此研究为今后L1基因分子流行病学调查、L1蛋白的结构生物学研究、疫苗研制以及HPV相关基础性研究提供了有用的资料。
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