【摘 要】
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[目的]模拟人椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)酸性环境,探讨酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion channel 1a,ASIC1a)的活化与内质网应激的关系.[方法]体外单层培养人正常髓
【机 构】
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东南大学医学院,东南大学附属中大医院脊柱外科中心,江苏南京,210009
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[目的]模拟人椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)酸性环境,探讨酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion channel 1a,ASIC1a)的活化与内质网应激的关系.[方法]体外单层培养人正常髓核细胞(nuc1eus pulposus cells,NPCs)系,不同pH值培养不同时间,模拟椎间盘酸性微环境,建立酸诱导的退变髓核细胞模型.CCK-8检测细胞增殖能力.Western blot、qPCR检测内质网应激.Western blot检测ASIC1a的表达.Fura-2/AM荧光探针检测ASIC1a活化介导的Ca2+内流.流式细胞术检测ASIC1a活化后细胞凋亡率.PcTX1(ASIC1a特异性阻断剂)阻断ASIC1a后,观察细胞凋亡及内质网应激指标变化情况.[结果]酸诱导髓核细胞凋亡,酸激活ASIC1a及内质网应激,PcTX1能降低促凋亡的内质网应激通路和髓核细胞凋亡率(P＜0.05),而未折叠蛋白反应相关指标无明显变化(P＞0.05).[结论]ASIC1a能够调控内质网应激中的促凋亡通路,阻断ASIC1能够保护酸诱导的髓核细胞凋亡.
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