细菌内同源重组快速构建和制备表达β-半乳糖苷酶的重组腺病毒

• 作 者: 王家宁 黄永章 孔霞 郭凌郧
• 机 构: 郧阳医学院附属人民医院,郧阳医学院附属人民医院
• 出 处: 郧阳医学院学报
• 发表日期: 2004年1期
• 关键词: 细菌 同源重组 制备 Β-半乳糖苷酶 重组腺病毒 基因治疗 homologous recombination Adenovirus gene therapyβ-
• 基金项目: 湖北省自然科学基金

目的:利用细菌内同源重组快速构建重组腺病毒质粒和制备重组腺病毒.方法:制备感受态BJ5183,将pAdEasy-1转化BJ5183,制备含pAdEasy-1的BJ5183感受态,将线性化的pShuttle-CMV-LacZ转化含pAdEasy-1的BJ5183感受态菌.采用细菌中同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdEasy-1-LacZ.pAdEasy-1-LacZ用PacⅠ线性化后,再用LipoVec介导其转染至AD293细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒,采用CsCl密度梯度离心法纯化重组腺病毒AdEasy