【摘 要】
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目的:探究过表达miR-145的脐带间充质干细胞外泌体对肾透明细胞癌细胞786-0舒尼替尼药物敏感性的影响.方法:分离纯化人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs),流式细胞术鉴定其细胞表型,茜素红及红油O染色观察其成骨与成脂分化能力;差速超速离心法分离hUCMSCs外泌体(hUCMSCs-Exo),电子显微镜观察外泌体的形态,粒径分析(nanoparticle tracking anal-ysis,NTA)检测其大小及分布
【机 构】
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新疆医科大学第一附属医院泌尿外科,新疆 乌鲁木齐 830054
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目的:探究过表达miR-145的脐带间充质干细胞外泌体对肾透明细胞癌细胞786-0舒尼替尼药物敏感性的影响.方法:分离纯化人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs),流式细胞术鉴定其细胞表型,茜素红及红油O染色观察其成骨与成脂分化能力;差速超速离心法分离hUCMSCs外泌体(hUCMSCs-Exo),电子显微镜观察外泌体的形态,粒径分析(nanoparticle tracking anal-ysis,NTA)检测其大小及分布,Western blot检测外泌体标志性蛋白分子CD9、CD63及CD81的表达,PKH67标记外泌体观察其能否被肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)细胞786-0所摄取;重组腺病毒感染hUCMSCs以过表达miR-145,RT-PCR检测感染后的hUCMSCs及hUCMSCs-Exo中miR-145的表达水平;CCK-8法检测舒尼替尼对不同浓度hUCMSCs-Exo(50、100、200μg/mL)处理的786-0细胞增殖活力及半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50)改变,Annexin V-FITC/PI双染法结合流式细胞术检测舒尼替尼对上述不同浓度hUCMSCs-Exo处理的786-0细胞的促凋亡作用;BALB/c裸鼠体内验证过表达miR-145的hUCMSCs-Exo对舒尼替尼抑制肾透明细胞癌生长的影响.结果:成功分离具有干细胞表型,且具有成骨、成脂分化潜能的hUCMSCs;同时检测发现hUCMSCs-Exo直径约为30～130 nm之间,且高表达CD9、CD63及CD81;PKH67标记结果显示hUCMSCs-Exo能成功被786-0细胞摄取吞噬;重组腺病毒感染能显著提高hUCMSCs与hUCMSCs-Exo中的miR-145表达水平,且过表达miR-145的hUCMSCs-Exo能以浓度依赖性显著促进舒尼替尼对786-0细胞的增殖抑制率,降低其IC50值,并增加细胞的凋亡率.裸鼠体内实验同样表明,过表达miR-145的hUCMSCs-Exo能在裸鼠体内提高786-0细胞对舒尼替尼的药物敏感性,增加后者对肾癌的生长抑制作用.结论:hUCMSCs能够有效地将过表达的miR-145转移到外泌体中,并被RCC细胞所摄取,从而在裸鼠体内外改善RCC对舒尼替尼的药物敏感性.
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