【摘 要】
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目的 应用RNA干扰技术研究bcl-2 siRNA对白血病细胞HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用.方法 扫描bcl-2 mRNA的全序列,记录从AUG启动子的AA及下游19个核苷酸肽作为潜在作用靶点.GC含量控制在30%～65%之间.由BLAST分析排除与其他基因有高度同源性的序列.由体外转录合成法合成双链bcl-2 siRNA,将bcl-2 siRNA转染入HL-60细胞.收集转染48 h
【机 构】
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济宁医学院病理教研室,421001,衡阳,南华大学心血管病研究所,南华大学生命科学与技术学院药物药理研究所,421001,衡阳,南华大学心血管病研究所,南华大学生命科学与技术学院药物药理研究所
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目的 应用RNA干扰技术研究bcl-2 siRNA对白血病细胞HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用.方法 扫描bcl-2 mRNA的全序列,记录从AUG启动子的AA及下游19个核苷酸肽作为潜在作用靶点.GC含量控制在30%～65%之间.由BLAST分析排除与其他基因有高度同源性的序列.由体外转录合成法合成双链bcl-2 siRNA,将bcl-2 siRNA转染入HL-60细胞.收集转染48 h后的细胞,流式细胞术检测蛋白表达情况,筛选出最佳作用序列进一步作各项指标检测.从mRNA水平、蛋白质水平等观察bcl-2 siRNA对细胞HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用.结果 收集转染48 h后的细胞,经细胞免疫荧光、RT-PCR、MTT及Hoechst33258荧光染色等指标检测,可见转染bcl-2 siRNA阳性组的细胞bcl-2基因表达降低及HL-60细胞凋亡等现象.而转染GAPDH siRNA组的细胞对bcl-2表达无影响.结论 采用生物信息学的方法设计出有效siRNA靶位点;bcl-2 siRNA可通过降低bcl-2 mRNA水平特异性抑制bcl-2蛋白质的表达。
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