【摘 要】
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目的:构建变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3/pacA与pcDNA3/pacP，即表面蛋白氨基端与中央区T、B细胞表位的两个基因疫苗。方法:通过PCR扩增，获得分别编码变形链球菌表面蛋
【机 构】
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华西医科大学口腔医学院 610041
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目的:构建变形链球菌表面蛋白真核表达质粒pcDNA3/pacA与pcDNA3/pacP，即表面蛋白氨基端与中央区T、B细胞表位的两个基因疫苗。方法:通过PCR扩增，获得分别编码变形链球菌表面蛋白PAc氨基端和中央区T、B细胞表位的两个目的基因pac-A和pac-P。将它们与真核穿梭表达载体pcDNA3进行体外重组，并转化大肠杆菌 XL1-Blue，采用菌落原位杂交筛选出阳性克隆子后，抽提重组质粒，进行酶切鉴定、Southern杂交分析和DNA序列测定。结果:真核表达质粒pcDNA3/pacA与pcDNA3/pacP构建正确，目的基因pac-A和pac-P定向插入至真核表达载体中，插入的相位正确，未改变目的基因的阅读框架。结论:真核表达质粒pcDNA3/pacA与pcDNA3/pacP分别包含了变形链球菌表面蛋白PAc氨基端和中央区免疫显性T、B细胞表位的编码基因，为基因疫苗进一步研究奠定基础。
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