【摘 要】
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目的 建立小鼠肝星状细胞(m-HSCs)分离纯化的高效稳定方案,并通过原代和传代培养观察其生物学特性.方法 依次应用预灌注液、0.1% Pronase E、0.075% Collagenase NB4G对在体肝脏原位灌注消化.肝脏离体后,在0.02%DNaseI液中磁力搅拌消化10 min,低速离心(25g,5 min)去除残余肝实质细胞,进一步用Optiprep密度梯度液获得纯化的m-HSCs.
【机 构】
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200032,上海,复旦大学附属中山医院普外科,200032,上海,复旦大学附属中山医院普外科,200032,上海,复旦大学附属中山医院普外科,200032,上海,复旦大学附属中山医院普外科,2000
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目的 建立小鼠肝星状细胞(m-HSCs)分离纯化的高效稳定方案,并通过原代和传代培养观察其生物学特性.方法 依次应用预灌注液、0.1% Pronase E、0.075% Collagenase NB4G对在体肝脏原位灌注消化.肝脏离体后,在0.02%DNaseI液中磁力搅拌消化10 min,低速离心(25g,5 min)去除残余肝实质细胞,进一步用Optiprep密度梯度液获得纯化的m-HSCs.采用锥虫蓝染色法评估细胞产量及活力;采用自发荧光及油红O染色鉴定细胞纯度;采用光镜、电镜以及Desmin/α-SMA免疫荧光双染色观察细胞形态和生物学特征.结果 分离得到的原代m-HSCs数量为(1.4±0.3)×106/g肝脏,细胞活率＞95%;原代培养24 b后,细胞纯度＞90%,传1代后细胞纯度接近100%.静止期和不同活化阶段的m-HSCs在亚显微结构以及α-SMA表达强度等方面存在差异.结论 建立的m-HSCs分离和纯化方法及体外细胞培养模型具有稳定性和高纯度性及高活率性。
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