假单胞菌生物合成L-半胱氨酸途径中脱巯基酶的研究

• 作 者: 余养盛 李洋 金永杰 白钢 杨文博
• 机 构: 南开大学生命科学学院
• 出 处: 微生物学通报
• 发表日期: 2006年4期
• 关键词: L-半胱氨酸脱巯基酶 假单胞菌 基因克隆 基因表达 酶学性质 L-cysteine desulfhydrase Pseudomonas sp. Gene
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目（No.30470053）天津市重点基金资助项目（No.05YFJZJC00900）

通过PCR方法扩增得到假单胞菌TS1138L-半胱氨酸脱巯基酶基因（cd），将其克隆至pBlueseript SKII载体，测定了含有L-半胱氨酸脱巯基酶基因的1．2kbDNA片段序列，并与其它菌株的脱巯基酶基因进行了同源性比较；同时，将其克隆至表达载体pET-21a（＋），IPTG诱导表达，表达产物经Ni-NTA柱亲合层析后，得到纯化的重组蛋白。利用脱巯基酶的活性染色方法对重组表达的L-半胱氨酸脱巯基酶进行了鉴定，并探讨了L-半胱氨酸脱巯基酶的酶学性质，以及在生物转化合成L-半胱氨酸途径中的关键作用。