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摘要：目的：主要对地肤子的药理作用研究现状进行概述。方法：通过查阅国内外关于地肤子的文献材料，再总结其研究进展。结果：地肤子包含的化学成分主要有皂苷类、挥发油、黄酮类化合物等，药理作用有降血糖、抗炎、抗瘙痒以及抗病原微生物等。结论：地肤子含多种化学成分，药理作用多样，其化学成分和药理作用之间的关系需进一步开发研究。
关键字：地肤子;化学成分;药理作用;研究现状
中图分类号：R285.5
地肤子为藜科植物地肤Kochia scoparia（L.） Schrad.的干燥成熟果实[1]，其味辛、苦、寒，主要功能与主治为清热利湿、祛风止痒，用于小便涩痛、阴痒带下、风疹、湿疹、皮肤瘙痒等[2]。地肤子的临床应用较为广泛，现代药理研究发现，地肤子和其他皮肤药物配伍可用于治疗小儿湿疹、皮肤瘙痒、扁平疣等皮肤疾病，且临床疗效良好。近年来，随着对地肤子的深入科学研究与创新开发应用，地肤子因具有宽泛的药理作用，日渐引起社会的广泛认识和关注。其次它因化学成分多样，所发挥的重要药理作用丰富，值得进一步探究研讨。本文通过总结文献资料，对有关地肤子的化学成分、药理作用的现代研究进行概述，现综述如下：
1.化学成分
1.1皂苷类
据《中药大辞典》记载，地肤子中主含三萜及其苷，已从中分离得到齐墩果酸等相关化合物[3]。而且地肤子中所含的主要的活性成分为皂苷类。经过近几年的系统研究，已从地肤子中分离得到大约16种皂苷类单体与化合物[4]。
1.2挥发油
高级脂肪酸酯是地肤子挥发油中含量最高的一种成分。杨敏等[5]通过研究超临界应用二氧化碳离子萃取法，并采用气相色谱-质谱联用仪结合分析技术，证实了这一科学说法。另外，还首次从该植物中分离得到9，12，15-十八碳三烯酸、十八碳酸等4种挥发油化合物。
1.3黄酮类
黄酮类化合物在多数的天然植物中都有存在。目前已证实黄酮类化合物本身具有比较强烈的抗氧化、抑菌、保护心脑血管等多项生理学和化学作用功效。地肤子黄酮类化合物主要有查尔酮、噢酮类等，此类化合物都具有2-苯基色原酮结构。卢向红等[6]通过对地肤子化学成分的研究，又发现几种新的黄酮类化合物及其衍生物。
1.4微量元素
地肤子化学成分中除因其含有的皂苷类、挥发油、黄酮类外，还可能含有各种微量元素。庞江琳等[7]经过等离子体微波发射器和光谱仪分析测定后，发现地肤子中含有较为丰富的钙、铁、镁、锌等有益微量元素，这对促进地肤子的研究发展有重要的意义。
1.5其他
阿魏酸及其衍生物能清除自由基，具有一定的抗氧化功能。程萍等[8]论文利用1，1-二苯基-2-苦味偕腙肼自由基法、Fe3+还原力测定试验，对照维生素C和水杨酸的抗氧化活性，发现地肤子中的阿魏酸衍生物，其抗氧化活性比水杨酸的活性高，与维生素C的活性近似，这在开展抗氧化剂应用方面具有很大的临床研究以及推广利用价值。
2.药理作用
2.1降血糖作用
初维[9]经过运用现代化学分离分析科学手段，探讨了地肤子多糖结构与降血糖药理作用的相互关系。先依照不同分子量对地肤子多糖进行初步分段后，再进行降血糖活性筛选，发现地肤子多糖结构多样且都具有较好的降血糖作用。其中，筛选后的总单一多糖-7为最佳降血糖活性成分，将其再经分离纯化后得到了均一多糖的一代总多糖-7a和新的总多糖-7b，而葡萄糖和半乳糖是组成单糖的主要成分。当以葡萄糖和半乳糖居多时，此时多糖结构的降血糖活性好。戴岳等[10]对地肤子的降血糖作用进行了深入研究，发现地肤子总皂苷对血糖小鼠的血糖浓度升高有明显抑制作用，但对正常小鼠的血糖升高无明显影响。对小鼠进行空腹灌胃或局部腹腔注射葡萄糖后，血糖水平显著升高，再经对比后发现对于空腹灌胃引起的小鼠血糖的升高，地膚子总皂苷可明显抑制，但对后者并无显著影响。而且这与双胍类等其他降糖药物的作用机理不同，猜测其可能通过影响葡萄糖在胃肠道的消化吸收或影响转运功能来发挥作用。对地肤子正丁醇部分降血糖作用的研究显示[11]，无论是高、低血糖还是正常血糖，地肤子正丁醇部分对小鼠胃排空活性的显著表现为抑制作用。尤其在血糖异常的严重情况下，其抑制胃排空活性作用明显增强。此外，给予的地肤子正丁醇部分浓度不同，阻止大鼠小肠对葡萄糖的消化吸收程度也不同，其作用的发生机制很有可能是通过减慢葡萄糖由胃向小肠的快速转运以及直接抑制大鼠小肠对葡萄糖的消化吸收。
2.2抗炎、抗过敏、抗瘙痒作用
地肤子中所含三萜皂苷为主要生物活性成分，其具有显著的抗炎药理作用，主要用于治疗瘙痒、湿疹等多种皮肤慢性疾病。刘建萍等[12]采用4-氨基吡啶（4-AP）所致因过敏性皮肤瘙痒刺激作用和抵抗组胺所致小鼠足肿胀作用试验，发现可以抑制速发型变态反应的主要生物活性成分为地肤子总皂苷，再经过对照后发现其抗过敏的致炎作用弱于抗过敏性瘙痒作用。稳定肥大免疫细胞膜、减少体内组胺的过量释放以及增强对抗过敏介质产生的致炎作用都可能是其主要作用机制。
吴春香等[13]选用两种瘙痒模型，观察其致痒阈和模型症状，探讨了地肤子醇提物对小鼠的皮肤瘙痒影响及其作用机制，结果显示地肤子醇提物能明显降低这两种模型的骚痒作用，表明地肤子醇提物的抗组织胺作用显著，有良好的止痒作用。还有研究表示地肤子水提物对迟发性超敏反应具有抑制作用，而这种反应抑制与抑制单核巨噬系统的作用机制密切有关[14]。
2.3抗病原微生物作用
吴静等[15]将地肤子用5种不同的溶剂经平行提取法同时进行提取，获得不同活性的提取液。观察提取液对6种植物病原菌（小麦赤霉病菌、茄子枯萎病菌、桃褐腐病菌、苹果轮纹病菌、苹果斑点落叶病菌和苹果腐烂病菌）的抑菌活性，结果表明地肤子的5种提取物的抑菌效果显著，尤其对桃褐腐病菌和苹果腐烂病菌的抑制作用较高。李睿等[16]对生物活性最强的地肤子进行了活性成分的分离，获得了活性成分流分L7。经室内常规分析方法观测了L7对苹果树腐烂菌的影响，结果发现抑菌率高达90%以上。再用石油醚、氯仿、正丁醇对地肤子进行萃取，并测定萃取物抑菌活性。发现三种萃取物均有较好的抑菌活性，但是石油醚萃取物抑菌效果较其他更为显著。韩璐等[17]将中药地肤子，经蒸馏水浸提，检测辣椒炭疽病菌的抑菌性能，并对地肤子提取液抑制植物病原真菌的作用以及通过提取、分离、纯化的活性成分进行研究，得到结论地肤子水提液能良好的抑制多种植物病原真菌，抑制率均高于50%，尤其对于辣椒炭疽病菌效果抑制率接近100%。从地肤子中分离出的单体化合物齐墩果酸比地肤子水提液的抑菌作用程度更强。曹静等[18]通过室内测试实验，得到地肤子乙醇提取物对马铃薯晚疫病菌孢子囊萌发和菌丝生长都有明显的生理抑制作用。 2.4抗氧化、抗衰老作用
自由基是人体活动中产生的一种代谢产物，若不及时清除，会加速机体的衰老。任何抗氧化剂都必须具有自由基分解清除能力。李培源等[19]人将地肤子通过冷浸法得到了乙醇、丙酮和乙酸乙酯三种溶剂提取物，并采用2，2?-连氮基-双-（3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸）（ABTS）体系评估其自由基分解清除氧化能力，结果分析发现地肤子的不同溶剂提取物都表现出较好的自由基分解清除氧化能力，尤其乙酸乙酯溶剂提取物的自由基清除氧化效果最好，并且其清除氧化能力随着三种溶剂提取物浓度的持续增加而不断增强。因此，以上三种地肤子提取物都可被应用到抗氧化剂中来使用。张浩等[20]通过最佳提取处理工艺在地肤子中提取了黄酮类化合物，经实验发现其具有一定的生物抗氧化活性，而且在一定的浓度范围内会减轻一些自由基和阻断脂质的过氧化反应。实验同样也充分证实了一些自由基清除率与地肤子中黄酮质量浓度变化呈正比，这在有效提高生物体抗氧化和抗衰老能力有极大研究意义。同时张竞怡等[21]通过正交实验，得到地肤子中的黄酮对羟自由基的清除能力显著，且清除作用与黄酮的浓度正交性相关。
2.5抗癌作用
研究表明，对于癌症的治疗方法主要通过抑制癌细胞增殖、阻止癌细胞在体内的侵袭转移等。王静[22]建立了细胞模型实验，检测地肤子皂苷的抗癌细胞活性。结果表明地肤子皂苷主要是影响线粒体从而诱导人体肝癌细胞的凋亡，除此之外，实验还发现地肤子皂苷还可以通过抑制血管粘附分子的水平等多方面，来阻止肝癌细胞的侵袭转移。由于SUMO特异性蛋白酶1（SUMO-specific proteasel，SENP1）在前列腺癌中高表达，并且与肿瘤的发生、发展和转移密切相关，被列为前列腺癌治疗的潜在靶标。吴静静[23]从地肤子中筛选得到具有1抑制活性的地肤子皂苷Ic，并经过过一系列体内外实验观察地肤子皂苷Ic对前列腺癌细胞的生长抑制效应，结果发现地肤子皂苷Ic通过改变SENP1的热稳定性以及降低SENP1在细胞内的表达，从而抑制前列腺癌细胞增殖，增加细胞的凋亡。这对抗癌新药的发展提供了新思路。
3.结语
地肤子作为常用的传统中药之一，具有丰富的药理作用。其有些主要药理作用仍然还需我们深入研究探讨，如地肤子皂苷对于癌细胞的影响。对地肤子的研究也仅限于皂苷成分研讨成果较多，而其他化学成分较少。因此，我们应该以现代科学方法，结合中医药理论，使地肤子在原来的基础上不断加以创新发展与提高，来拓展地肤子新的药物用途，让我们更加充分地认识到地肤子的药用价值，愈加有效利用地肤子这一植物资源，更好地为人民健康服务。
参考文献
[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第25卷）[M].北京.科学出版社，1979.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2015：68-69.
[3]江苏新医学院.中药大辞典（上册）[M].上海：上海科学技术出版社，1986.
[4]蒋剑平，沈小青，范海珠.地肤子化学成分及药理活性研究进展[J].中华中医药学刊，2011，29（12）：2704-2706.
[5]杨 敏，李 菁，蔡 洁.地肤子油的超临界CO2萃取及GC-MS分析[J].中药材， 2003，26（7）：494.
[6]卢向红，徐向东，付红伟，等.地肤子化学成分的研究[J].中国药学杂志，2012，47（5）：338-342
[7]庞江琳，陈杰，李尚德，等.中藥地肤子的微量元素含量分析[J].广东微量元素科学，2004（8）：46-48.
[8]程萍，张卫，彭秀丽.地肤提取物及其阿魏酸衍生物的体外抗氧化活性研究[J].河南工业大学学报（自然科学版），2016，37（4）：91-93.
[9]初维.地肤子多糖的结构及活性研究[D].佳木斯大学，2017.
[10]戴岳，刘学英.地肤子总苷降糖作用的研究[J].中国野生植物资源，2005， 21（5）：36-38.
[11]戴岳，夏玉凤，林己茏.地肤子正丁醇部分降糖机制的研究[J].中药药理与临床，2003，19（5）：21-24.
[12]刘建萍，由宝昌，黎星辉，等.地肤子皂苷抗过敏活性部位及量效关系的研究[J].山东农业科学，2009（8）：49-52.
[13]吴春香，申万坤.地肤子醇提物止痒作用的实验研究[J].中医药临床杂志， 2009，21（5）：449-450.
[14]戴岳，黄罗生，冯国雄，等.地肤子对单核巨噬系统及迟发型超敏反应的抑制作用[J].中国药科大学学报，1994，25（1）：44-48.
[15]吴静，师光禄，苏学友，等.地肤子提取物对几种植物病原菌生物活性的影响 [J].北京农学院学报，2008，23（3）：36-39.
[16]李睿.地肤子提取物对苹果树腐烂病菌的生物活性研究[D].太原：山西农业大学，2016.
[17]韩璐.地肤子抑菌成分的提取分离及抑菌作用研究[D].长春：吉林农业大学，2015.
[18]曹静，赵志军，马艳芝.地肤子等9种中草药提取物对马铃薯晚疫病菌的影响[J].江苏农业科学，2009，5：149-150.
[19]李培源，霍丽妮，苏炜，等.地肤子自由基清除活性和总酚含量测定研究[J].湖北农业科学，2016，55（11）：2899-2901.
[20]张浩，易华，张欣，等.地肤子黄酮类提取物的抗氧化活性研究[J].浙江农业科学， 2012，26（7）：30-32.
[21]张竞怡，王文杰，史欢，等.地肤子总黄酮提取工艺及其抗氧化活性研究[J].化工时刊， 2011（6）：1340-1342，1344.
[22]王静.地肤子皂苷对HepG2人肝癌细胞凋亡和迁移侵袭的影响及其作用机制研究[D].西北农林科技大学，2014.
[23]吴静静.一种新的天然SENP1抑制剂-地肤子皂苷Ic，抑制前列腺癌细胞的增殖[D].上海：上海交通大学，2016.
关键字：地肤子;化学成分;药理作用;研究现状
中图分类号：R285.5
地肤子为藜科植物地肤Kochia scoparia（L.） Schrad.的干燥成熟果实[1]，其味辛、苦、寒，主要功能与主治为清热利湿、祛风止痒，用于小便涩痛、阴痒带下、风疹、湿疹、皮肤瘙痒等[2]。地肤子的临床应用较为广泛，现代药理研究发现，地肤子和其他皮肤药物配伍可用于治疗小儿湿疹、皮肤瘙痒、扁平疣等皮肤疾病，且临床疗效良好。近年来，随着对地肤子的深入科学研究与创新开发应用，地肤子因具有宽泛的药理作用，日渐引起社会的广泛认识和关注。其次它因化学成分多样，所发挥的重要药理作用丰富，值得进一步探究研讨。本文通过总结文献资料，对有关地肤子的化学成分、药理作用的现代研究进行概述，现综述如下：
1.化学成分
1.1皂苷类
据《中药大辞典》记载，地肤子中主含三萜及其苷，已从中分离得到齐墩果酸等相关化合物[3]。而且地肤子中所含的主要的活性成分为皂苷类。经过近几年的系统研究，已从地肤子中分离得到大约16种皂苷类单体与化合物[4]。
1.2挥发油
高级脂肪酸酯是地肤子挥发油中含量最高的一种成分。杨敏等[5]通过研究超临界应用二氧化碳离子萃取法，并采用气相色谱-质谱联用仪结合分析技术，证实了这一科学说法。另外，还首次从该植物中分离得到9，12，15-十八碳三烯酸、十八碳酸等4种挥发油化合物。
1.3黄酮类
黄酮类化合物在多数的天然植物中都有存在。目前已证实黄酮类化合物本身具有比较强烈的抗氧化、抑菌、保护心脑血管等多项生理学和化学作用功效。地肤子黄酮类化合物主要有查尔酮、噢酮类等，此类化合物都具有2-苯基色原酮结构。卢向红等[6]通过对地肤子化学成分的研究，又发现几种新的黄酮类化合物及其衍生物。
1.4微量元素
地肤子化学成分中除因其含有的皂苷类、挥发油、黄酮类外，还可能含有各种微量元素。庞江琳等[7]经过等离子体微波发射器和光谱仪分析测定后，发现地肤子中含有较为丰富的钙、铁、镁、锌等有益微量元素，这对促进地肤子的研究发展有重要的意义。
1.5其他
阿魏酸及其衍生物能清除自由基，具有一定的抗氧化功能。程萍等[8]论文利用1，1-二苯基-2-苦味偕腙肼自由基法、Fe3+还原力测定试验，对照维生素C和水杨酸的抗氧化活性，发现地肤子中的阿魏酸衍生物，其抗氧化活性比水杨酸的活性高，与维生素C的活性近似，这在开展抗氧化剂应用方面具有很大的临床研究以及推广利用价值。
2.药理作用
2.1降血糖作用
初维[9]经过运用现代化学分离分析科学手段，探讨了地肤子多糖结构与降血糖药理作用的相互关系。先依照不同分子量对地肤子多糖进行初步分段后，再进行降血糖活性筛选，发现地肤子多糖结构多样且都具有较好的降血糖作用。其中，筛选后的总单一多糖-7为最佳降血糖活性成分，将其再经分离纯化后得到了均一多糖的一代总多糖-7a和新的总多糖-7b，而葡萄糖和半乳糖是组成单糖的主要成分。当以葡萄糖和半乳糖居多时，此时多糖结构的降血糖活性好。戴岳等[10]对地肤子的降血糖作用进行了深入研究，发现地肤子总皂苷对血糖小鼠的血糖浓度升高有明显抑制作用，但对正常小鼠的血糖升高无明显影响。对小鼠进行空腹灌胃或局部腹腔注射葡萄糖后，血糖水平显著升高，再经对比后发现对于空腹灌胃引起的小鼠血糖的升高，地膚子总皂苷可明显抑制，但对后者并无显著影响。而且这与双胍类等其他降糖药物的作用机理不同，猜测其可能通过影响葡萄糖在胃肠道的消化吸收或影响转运功能来发挥作用。对地肤子正丁醇部分降血糖作用的研究显示[11]，无论是高、低血糖还是正常血糖，地肤子正丁醇部分对小鼠胃排空活性的显著表现为抑制作用。尤其在血糖异常的严重情况下，其抑制胃排空活性作用明显增强。此外，给予的地肤子正丁醇部分浓度不同，阻止大鼠小肠对葡萄糖的消化吸收程度也不同，其作用的发生机制很有可能是通过减慢葡萄糖由胃向小肠的快速转运以及直接抑制大鼠小肠对葡萄糖的消化吸收。
2.2抗炎、抗过敏、抗瘙痒作用
地肤子中所含三萜皂苷为主要生物活性成分，其具有显著的抗炎药理作用，主要用于治疗瘙痒、湿疹等多种皮肤慢性疾病。刘建萍等[12]采用4-氨基吡啶（4-AP）所致因过敏性皮肤瘙痒刺激作用和抵抗组胺所致小鼠足肿胀作用试验，发现可以抑制速发型变态反应的主要生物活性成分为地肤子总皂苷，再经过对照后发现其抗过敏的致炎作用弱于抗过敏性瘙痒作用。稳定肥大免疫细胞膜、减少体内组胺的过量释放以及增强对抗过敏介质产生的致炎作用都可能是其主要作用机制。
吴春香等[13]选用两种瘙痒模型，观察其致痒阈和模型症状，探讨了地肤子醇提物对小鼠的皮肤瘙痒影响及其作用机制，结果显示地肤子醇提物能明显降低这两种模型的骚痒作用，表明地肤子醇提物的抗组织胺作用显著，有良好的止痒作用。还有研究表示地肤子水提物对迟发性超敏反应具有抑制作用，而这种反应抑制与抑制单核巨噬系统的作用机制密切有关[14]。
2.3抗病原微生物作用
吴静等[15]将地肤子用5种不同的溶剂经平行提取法同时进行提取，获得不同活性的提取液。观察提取液对6种植物病原菌（小麦赤霉病菌、茄子枯萎病菌、桃褐腐病菌、苹果轮纹病菌、苹果斑点落叶病菌和苹果腐烂病菌）的抑菌活性，结果表明地肤子的5种提取物的抑菌效果显著，尤其对桃褐腐病菌和苹果腐烂病菌的抑制作用较高。李睿等[16]对生物活性最强的地肤子进行了活性成分的分离，获得了活性成分流分L7。经室内常规分析方法观测了L7对苹果树腐烂菌的影响，结果发现抑菌率高达90%以上。再用石油醚、氯仿、正丁醇对地肤子进行萃取，并测定萃取物抑菌活性。发现三种萃取物均有较好的抑菌活性，但是石油醚萃取物抑菌效果较其他更为显著。韩璐等[17]将中药地肤子，经蒸馏水浸提，检测辣椒炭疽病菌的抑菌性能，并对地肤子提取液抑制植物病原真菌的作用以及通过提取、分离、纯化的活性成分进行研究，得到结论地肤子水提液能良好的抑制多种植物病原真菌，抑制率均高于50%，尤其对于辣椒炭疽病菌效果抑制率接近100%。从地肤子中分离出的单体化合物齐墩果酸比地肤子水提液的抑菌作用程度更强。曹静等[18]通过室内测试实验，得到地肤子乙醇提取物对马铃薯晚疫病菌孢子囊萌发和菌丝生长都有明显的生理抑制作用。 2.4抗氧化、抗衰老作用
自由基是人体活动中产生的一种代谢产物，若不及时清除，会加速机体的衰老。任何抗氧化剂都必须具有自由基分解清除能力。李培源等[19]人将地肤子通过冷浸法得到了乙醇、丙酮和乙酸乙酯三种溶剂提取物，并采用2，2?-连氮基-双-（3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸）（ABTS）体系评估其自由基分解清除氧化能力，结果分析发现地肤子的不同溶剂提取物都表现出较好的自由基分解清除氧化能力，尤其乙酸乙酯溶剂提取物的自由基清除氧化效果最好，并且其清除氧化能力随着三种溶剂提取物浓度的持续增加而不断增强。因此，以上三种地肤子提取物都可被应用到抗氧化剂中来使用。张浩等[20]通过最佳提取处理工艺在地肤子中提取了黄酮类化合物，经实验发现其具有一定的生物抗氧化活性，而且在一定的浓度范围内会减轻一些自由基和阻断脂质的过氧化反应。实验同样也充分证实了一些自由基清除率与地肤子中黄酮质量浓度变化呈正比，这在有效提高生物体抗氧化和抗衰老能力有极大研究意义。同时张竞怡等[21]通过正交实验，得到地肤子中的黄酮对羟自由基的清除能力显著，且清除作用与黄酮的浓度正交性相关。
2.5抗癌作用
研究表明，对于癌症的治疗方法主要通过抑制癌细胞增殖、阻止癌细胞在体内的侵袭转移等。王静[22]建立了细胞模型实验，检测地肤子皂苷的抗癌细胞活性。结果表明地肤子皂苷主要是影响线粒体从而诱导人体肝癌细胞的凋亡，除此之外，实验还发现地肤子皂苷还可以通过抑制血管粘附分子的水平等多方面，来阻止肝癌细胞的侵袭转移。由于SUMO特异性蛋白酶1（SUMO-specific proteasel，SENP1）在前列腺癌中高表达，并且与肿瘤的发生、发展和转移密切相关，被列为前列腺癌治疗的潜在靶标。吴静静[23]从地肤子中筛选得到具有1抑制活性的地肤子皂苷Ic，并经过过一系列体内外实验观察地肤子皂苷Ic对前列腺癌细胞的生长抑制效应，结果发现地肤子皂苷Ic通过改变SENP1的热稳定性以及降低SENP1在细胞内的表达，从而抑制前列腺癌细胞增殖，增加细胞的凋亡。这对抗癌新药的发展提供了新思路。
3.结语
地肤子作为常用的传统中药之一，具有丰富的药理作用。其有些主要药理作用仍然还需我们深入研究探讨，如地肤子皂苷对于癌细胞的影响。对地肤子的研究也仅限于皂苷成分研讨成果较多，而其他化学成分较少。因此，我们应该以现代科学方法，结合中医药理论，使地肤子在原来的基础上不断加以创新发展与提高，来拓展地肤子新的药物用途，让我们更加充分地认识到地肤子的药用价值，愈加有效利用地肤子这一植物资源，更好地为人民健康服务。
参考文献
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[12]刘建萍，由宝昌，黎星辉，等.地肤子皂苷抗过敏活性部位及量效关系的研究[J].山东农业科学，2009（8）：49-52.
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