【摘 要】
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目的 探讨激活胰岛素样生长因子(IGF)-I受体后,大鼠结肠平滑肌细胞(SMC)合成千细胞因子(SCF)的变化及其信号途径。方法酶解法分离培养SD大鼠结肠SMC,免疫组化鉴定。2.5×10^5/mlSMC接种培养,①加入100ttg/LIGF—1分别培养0、8、16、24、48h;②分别加入0、5、10、50、100、150gg/LIGF-I培养16h。同时设空白对照组和IGF-I组。免疫荧光、W
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院消化科,210029,南京医科大学第一附属医院消化科,210029,南京医科大学第一附属医院消化科,210029,南京医科大学第一附属医院消化科,210029,南京医科大学第一
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目的 探讨激活胰岛素样生长因子(IGF)-I受体后,大鼠结肠平滑肌细胞(SMC)合成千细胞因子(SCF)的变化及其信号途径。方法酶解法分离培养SD大鼠结肠SMC,免疫组化鉴定。2.5×10^5/mlSMC接种培养,①加入100ttg/LIGF—1分别培养0、8、16、24、48h;②分别加入0、5、10、50、100、150gg/LIGF-I培养16h。同时设空白对照组和IGF-I组。免疫荧光、Western印迹、逆转录(RT)-PCR法检测SMC经不同浓度和不同时间IGF—I刺激后SCF的表达。并用50μmol/LLY-294002、PD-98059分别阻断磷脂酰激醇3激酶(P13K)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径,观察SCF的变化是否与P13K、MAPK信号途径有关。结果在无血清培养条件下,SCF在大鼠结肠SMC中少量表达,低剂量IGF—I(5和10μg/L)对SCF表达无影响,中、高剂量IGF—I(50、100、150μg/L)诱导其表达增加,100μg/L可能为体外最大有效浓度,其促SCF合成的最高峰在第16小时。分别用LY-294002、PD-98059预处理SMC、再用IGF—I诱导,LY-294002对SCF的表达无影响、PD-98059能部分阻断SCF的表达。结论IGF—I可能通过MAPK信号通道诱导SCF在结肠SMC中的表达,提示其可能是IGF-I调控结肠SMC产生SCF的机制。
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