小RNA干扰细胞周期蛋白Y基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖的影响

• 作 者: 邰隽 李爱东 饶远生 黄育北 黄志刚 于振坤 陈晓红 周维国 肖潇 王棽 韩阳 刘悄吟 房居高 倪鑫
• 机 构: 首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所,儿童耳鼻咽喉头颈科学北京市重点实验室,100045,首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科,首都医科大学附属北京安贞医院耳鼻咽喉头颈外科,天津医科大
• 发表日期: 2013年48期
• 关键词: 细胞周期蛋白类 喉肿瘤 细胞系 肿瘤 RNA 小分子干扰 细胞增殖

目的

利用RNA干扰技术下调细胞周期蛋白Y（CyclinY，CCNY）基因的表达，观察其对喉癌Hep-2细胞增殖的影响。

方法

构建针对CCNY基因的短发夹RNA（shorthairpinRNA，shRNA）真核表达载体，包装慢病毒感染喉癌Hep-2细胞。将细胞分为2组，对照组和实验组（感染CCNYshRNA慢病毒组）。运用Real-timePCR检测CCNY在RNA水平的变化；四甲基偶氮唑蓝法和平板克隆形成实验检测CCNY表达下调对细胞增殖的影响。

结果

成功包装表达CCNYshRNA的慢病毒并感染Hep-2细胞，shRNA下调CCNY的表达后，与对照组相比CCNY在mRNA水平的表达显著下降，抑制率为75.3%（P<0.05）。表达CCNYshRNA的慢病毒感染5d后，继续培养6d，细胞的生长明显受到抑制（P<0.001）。细胞在体外培养10d后形成克隆的潜力降低了60%。

结论

靶向CCNY基因RNA干扰能够阻抑喉癌Hep-2细胞的CCNY表达，抑制细胞增殖，CCNY基因有望成为喉癌基因治疗靶点。