【摘 要】
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目的探讨大鼠精原细胞的分离纯化方法及纯化后的细胞特性.方法应用复合酶消化法制备10 d龄SD大鼠的睾丸单细胞悬液,采用差速贴壁结合非连续性Percoll密度梯度离心的方法纯化
【机 构】
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上海,复旦大学上海医学院解剖组胚系
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目的探讨大鼠精原细胞的分离纯化方法及纯化后的细胞特性.方法应用复合酶消化法制备10 d龄SD大鼠的睾丸单细胞悬液,采用差速贴壁结合非连续性Percoll密度梯度离心的方法纯化精原细胞.分别以c-kit和α6-整合素作为细胞标记,观察睾丸组织中的精原细胞与纯化后细胞的免疫化学特征.通过流式细胞仪分别检测纯化后细胞表达c-kit和α6-整合素的阳性率.结果在睾丸组织中精原细胞特异表达c-kit和α6-整合素.纯化后的单细胞中有c-kit和α6-整合素的阳性表达.流式细胞仪检测:以c-kit作为细胞标记,未纯化组的阳性表达率为1.59%±0.04%,纯化组为68.33%±2.45%,两组差异非常显著(P＜0.01);以α6-整合素作为细胞标记,未纯化组的阳性表达率为2.38%±0.60%,纯化组为72.04%±3.65%,两组差异非常显著(P＜0.01).台盼蓝排斥试验表明纯化后细胞的活性率＞95%.结论C-kit、α6-整合素可作为特定时期精原细胞的表面标志.采用复合酶消化、差速贴壁结合非连续性Percoll密度梯度离心的方法纯化精原细胞,能获得纯度和活性较高的精原细胞.
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