HA/β-TCA 复合材料与同种异体骨体外兔脂肪干细胞生物相容性的对比实验

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目的:探讨羟基磷灰石/β-磷酸三钙(hydroxyapatite/tricalcium phosphate,HA/β-TCA)复合材料与同种异体骨体外兔脂肪干细胞(rADSCs)生物相容性,为骨组织工程选择支架材料提供实验基础。方法取4月龄新西兰大白兔腹股沟区脂肪,Ⅰ型胶原酶消化、分离、培养及传代原细胞,第2代 rADSCs 消化后,加入成骨培养液中诱导分化,分别行碱性磷酸酶染色、茜素红染色以鉴定分化结果,扩增后分别与 HA/β-TCA 及同种异体骨复合培养,通过扫描电子显微镜、碱性磷酸酶方法检测 rADSCs 在 HA/β-TCA 及同种异体骨表面的粘附能力、增殖活力,评价 rADSCs 与 HA/β-TCA 及同种异体2种材料的生物相容性,并比较分析。结果原代细胞培养1 w 后约90%的融合,传代后平均3 d 即可达到90%以上的融合。第2代 rADSCs 分化诱导后细胞增殖良好,分化诱导15 d后行茜红素染色,细胞结节中央染色为红色团块,形成片状钙化影;碱性磷酸酶染色可见细胞浆内呈浅棕色至棕褐色颗粒。接种培养后的第3天、第6天、第9天,同种异体骨与复合材料各时间点的吸光度(OD)值差异无统计学意义。rADSCs 在2种支架材料培养11 d 后,电镜观察可见有多角形细胞伸出、突起,粘附于材料上和空隙中,并向四围伸展生长,邻近细胞紧密链接,形成拉网状结构。细胞表面分泌很多细胞外基质,填充于支架材料的孔隙中。细胞在2种支架材料上生长良好,增殖明显并保持均匀分布。结论rADSCs 与 HA/β-TCA 生物相容性不弱于同种异体骨,HA/β-TCA 复合材料为骨组织工程支架提供了良好来源。
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