【摘 要】
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目的 研究缺氧预处理条件下,骨髓间充质干细胞分泌的exosome的特征；探索心肌细胞H9C2是否骨髓间充质干细胞exosome作用的靶细胞之一,以及H9C2对骨髓间充质干细胞exosome的摄取
【机 构】
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山东大学齐鲁医院心内科,济南,250012;山东大学附属济南市中心医院保健科,济南,250013;南通大学附属医院心内科,江苏南通,226001;兰州大学第二附属医院CICU,兰州,730030;福建
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目的 研究缺氧预处理条件下,骨髓间充质干细胞分泌的exosome的特征；探索心肌细胞H9C2是否骨髓间充质干细胞exosome作用的靶细胞之一,以及H9C2对骨髓间充质干细胞exosome的摄取是否随时间有一定的变化特征.方法 采用分步离心结合蔗糖/D2O垫超速离心方法分离提取干细胞分泌的exosome囊体颗粒.采用透射电镜和Western blotting法鉴定提取物是否为exosome.采用图像分析软件Image-Pro Plus 6.0对透射电镜结果中exosome数据进行采集,采用excel和统计软件Graph Pad 5.0对采集得到的exosome数据进行统计,以明确exosome的直径分布区间和平均半径等特征.采用绿色荧光染料PKH-67标记exosome,将标记的exosome与H9C2共孵育,观察exosome能否被心肌细胞H9C2摄取.将exosome与H9C2共孵育的不同时间段,观察H9C2对exosome的摄取随时间变化的特征.结果 提取物呈微型囊体结构,形态近似球形或者椭球形,大小均一,均匀分散的分布在视野中,提取物均阳性表达CD63和CD9分子,且较CD63分子,提取物更高表达CD9分子;缺氧预处理条件下,骨髓间充质干细胞exosome直径的集中分布范围是20～ 60 nm,半径为(17.03±0.40) nm;exosome与心肌细胞H9C2共孵育结果显示,仅实验组H9C2细胞质内可见大量的exosome绿色荧光颗粒;H9C2摄取exosome的时间特征显示,对照组4个亚组中H9C2对exosomes的摄取情况无明显不同.实验组各亚组显示,exosome与H9C2共孵育1h,H9C2细胞质中即开始观察到标记的exosome;共孵育1.5 ～2.5h,H9C2细胞质中exosome绿色荧光颗粒数量较共孵育其他时间段的多,荧光强度较共孵育其他时间段的强.结论 成功分离提取到了缺氧预处理条件下的大鼠骨髓间充质干细胞exosome;心肌细胞H9C2是骨髓间充质干细胞exosome生物学作用的靶细胞;H9C2对骨髓间充质干细胞exosome的摄取情况随时间的延长有明显的变化.
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