生理浓度丁酸钠对Caco-2细胞肠屏障作用中JNK通路的效应

来源 :中华小儿外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaoyaya310
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目的 观察生理浓度丁酸钠作用Caco-2细胞肠屏障时JNK细胞信号通路的作用及与AMPK通路的关系.方法 建立Caco-2细胞单层肠屏障模型,分成不加药物的对照组(Con组)、仅添加2 mmol/L丁酸钠的生理浓度丁酸钠组(2BA组)、仅加入JNK特异性抑制剂的20μmol/LSP600125组(SP组)、20 μmol/L SP600125+生理浓度丁酸钠组(Mix组).检测各组处理后24、48、72 h跨上皮细胞电阻(TER)、CCK-8法吸光度及72 h菊粉-FITC透过率、流式细胞仪检测细胞凋亡水平、吖啶橙(AO)/碘化丙啶(PI)双染法荧光显微镜检测凋亡率、Western blot法检测JNK、AMPK、ACC等蛋白的表达.结果 2BA组TER在药物作用后24、48、72 h均明显高于Con组,以72 h时最显著,此时2BA组为(509.64±12.62)Ω·cm2,而Con组为(459.30±7.62)Ω·cm2 (P<0.05);Mix组TER为(261.01±9.22)Ω·cm2较2BA组(509.64±12.62)Ω·cm2低.Mix组72 h CCK-8吸光度为0.47±0.13、72 h菊粉-FITC为(7.89±0.80)cm/h、流式细胞仪凋亡水平为(61.23±1.54)%及AO/PI双染荧光显微镜凋亡结果为9.7±1.3,均比2BA组的0.98±0.08、(4.05±1.38)cm/h、(15.90±5.95)%、5.5±1.3高(P<0.05).2BA组p-AMPK、p-ACC水平较Con组和Mix组上调(P<0.05).Mix组p-JNK水平与2BA组相比显著下调(P<().01).结论 生理浓度丁酸钠可增强肠屏障功能,而JNK特异性抑制剂可破坏这一作用,提示JNK在生理浓度丁酸钠增强肠屏障功能起协同作用,这一作用可能与AMPK活化有关。

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