【摘 要】
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生长激素(growth hormone)基因表达的早期研究中,我们证明了生长激素mRNA的翻译产物是一种前体蛋白质——前生长激素(pregrowth hormone)。探究生长激素基因表达在核内的步骤
【机 构】
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美国纽约“纪念斯隆-凯特林癌中心”; 美国纽约“纪念斯隆-凯特林癌中心” 细胞基因表达和调控实验室; 细胞基因表达和调控实验室; 细胞基因表达和调控实验室;
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生长激素(growth hormone)基因表达的早期研究中,我们证明了生长激素mRNA的翻译产物是一种前体蛋白质——前生长激素(pregrowth hormone)。探究生长激素基因表达在核内的步骤(转录及转录产物的加工过程),需要大量纯的、与生长激素mRNA互补的DNA(cDNA)。为了生产这种cDNA,首先应从大鼠脑下垂体肿瘤细胞(GH-细胞)中部份纯化出生长激素mRNA。然后,采用重组DNA的技术,把mRNA建成含有互补于该mRNA的cDNA的重组体细菌克隆。为了鉴定含有生长激素特异DNA顺序的细菌质粒(定名为pBR 322-GH1),我们创造了一种验证性的杂交-翻译程序。这一程序是将生长激素mRNA和另外一些mRNA的混合物,同固定在硝化纤维素滤膜上的质粒DNA杂交,然后回收杂交上去的mRNA,再在无细胞系统中进行翻译,以便确定它是否能翻译出大量的前体生长激素,倘若一种信使RNA的翻译产物可以被鉴别,那末上述程序应该普遍适用于鉴定含有与任何mRNA互补的DNA的重组体质粒。为着手研究生长激素基因的转录,把GH-细胞短暂地与~3H尿嘧啶核苷酸一起温育,然后提取出细胞核的RNA,并按照分子的大小加以分部。将各个分部的RNA同pBR322-GH1的DNA杂交时,发现了一种20S(2500至3000碱基)的RNA分子。这种分子是聚腺苷酸化的,并比细胞质中成熟的生长激素mRNA大2.5到3.0倍?
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