【摘 要】
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目的 探究竹沥对肝纤维化小鼠Ras同源基因-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Ras homologous gene-Rho-associated coiled-coil containing kinases,Rho-ROCK)信号转导通路的作用,分析竹沥抗肝纤维化的分子机制.方法 将40只KM小鼠随机分为空白组、模型组、竹沥组和丹参酚酸B组,每组10只,模型组、竹沥组和丹参酚酸B组小鼠给予40%CCl4花生油混合液(剂量2μl/g),空白组给予等量生理盐水,腹腔注射,2次/周,连续8周.模型构建成功后,竹沥组
【机 构】
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河北省承德市宽城满族自治县医院 消化内科,河北 承德,067600;广西中医药大学 赛恩斯新医药学院,南宁 530222;广西中医药大学 赛恩斯新医药学院,南宁 530222;广西中医药大学 基础医学
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目的 探究竹沥对肝纤维化小鼠Ras同源基因-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Ras homologous gene-Rho-associated coiled-coil containing kinases,Rho-ROCK)信号转导通路的作用,分析竹沥抗肝纤维化的分子机制.方法 将40只KM小鼠随机分为空白组、模型组、竹沥组和丹参酚酸B组,每组10只,模型组、竹沥组和丹参酚酸B组小鼠给予40%CCl4花生油混合液(剂量2μl/g),空白组给予等量生理盐水,腹腔注射,2次/周,连续8周.模型构建成功后,竹沥组以竹沥灌胃,每日1次,每次30 ml/100 g;丹参酚酸B组以丹参酚酸B溶液灌胃,每日1次,每次用量0.25 mg/100 g;其余2组给予等量生理盐水灌胃,持续4周.末次给药后对小鼠眼球取血并处死,采用HE染色观察肝组织病理并进行Ishak评分,采用γ放射免疫全自动双探头计数器检测肝纤维化指标,包括透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测RhoA和ROCK2 mRNA的相对表达量,采用Western blot检测RhoA和ROCK2蛋白的相对表达量.结果 空白组、模型组、竹沥组和丹参酚酸B组小鼠Ishak评分分别为(0.40±0.05)分、(4.80±0.84)分、(3.20±0.45)分和(2.80±0.83)分,差异有统计学意义(F=34.807,P<0.001),其中空白组显著低于模型组、竹沥组和丹参酚酸B组(t=8.690,P<0.001;t=5.674,P<0.001;t=4.768,P=0.001),模型组显著高于竹沥组和丹参酚酸B组(t=3.016,P=0.017;t=3.922,P=0.004),竹沥组和丹参酚酸B组差异无统计学意义(t=0.809,P=0.464).空白组小鼠肝纤维化指标均显著低于模型组、竹沥组和丹参酚酸B组[透明质酸:(26.14±2.69)μg/L vs(53.69±5.87)μg/L vs(37.21±3.04)μg/L vs(32.88±3.60)μg/L,层粘连蛋白:(120.37±15.57)μg/L vs(214.48±21.39)μg/L vs(162.54±19.22)μg/L vs(161.66±14.23)μg/L,Ⅲ型前胶原:(4.04±1.01)μg/L vs(11.70±3.09)μg/L vs(8.12±1.87)μg/L vs(7.80±1.72)μg/L,Ⅳ型胶原:(12.96±2.82)μg/L vs(31.34±4.44)μg/L vs(23.72±3.69)μg/L vs(22.85±3.00)μg/L;P均<0.05],模型组小鼠肝纤维化指标均显著高于竹沥组和丹参酚酸B组(P均0.05).空白组RhoA和ROCK2 mRNA相对表达量均显著低于模型组、竹沥组和丹参酚酸B组(RhoA mRNA:1.05±0.18 vs 2.61±0.37 vs 1.62±0.21 vs 1.50±0.14,ROCK2 mRNA:1.04±0.17 vs 2.32±0.29 vs 1.46±0.08 vs 1.45±0.09;P均<0.05),模型组RhoA和ROCK2 mRNA相对表达量均显著高于竹沥组和丹参酚酸B组(P均0.05).空白组RhoA和ROCK2蛋白相对表达量均显著低于模型组、竹沥组和丹参酚酸B组(RhoA蛋白:0.14±0.03 vs 0.43±0.05 vs 0.26±0.02 vs 0.30±0.15;ROCK2蛋白:0.28±0.03 vs 0.76±0.09 vs 0.38±0.04 vs 0.49±0.03;P均<0.05),模型组RhoA和ROCK2蛋白相对表达量均显著高于竹沥组和丹参酚酸B组(P均0.05).结论 竹沥可抑制Rho-ROCK信号转导通路的活动,可能是其抗肝纤维化的作用机制.
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