【摘 要】
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目的:通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰NFBD1(nuclear factor with BRCT domains protein 1)基因的表达,并探讨其对鼻咽癌CNE-1细胞放射敏感性的影响。方法:以慢
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科,重庆医科大学附属第一医院肿瘤科,重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心,生物化学与分子生物学教研室,
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目的:通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰NFBD1(nuclear factor with BRCT domains protein 1)基因的表达,并探讨其对鼻咽癌CNE-1细胞放射敏感性的影响。方法:以慢病毒感染的方法将特异性针对NFBD 1基因的shRNA转入CNE-1细胞,并用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞;分别采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)及蛋白质印迹法检测NFBD1 mRNA和蛋白的表达;以克隆形成和FCM法检测沉默NFBD 1基因对CNE-1细胞放射敏感性的影响。结果:NFBD1-shRNA慢病毒载体感染后,CNE-1细胞中NFBD1 mRNA和蛋白表达水平明显降低。各组细胞经6 MeV电子线照射后,NFBD1-shRNA组细胞的凋亡率和G2/M期细胞所占的比例均较阴性对照组[negative control-shRNA(NC-shRNA)]明显增加(P<0.05),细胞存活分数较NC-shRNA组明显降低(P<0.05)。结论:采用慢病毒感染的方法靶向NFBD 1基因的RNA干扰可稳定沉默NFBD1的表达,从而增加鼻咽癌细胞对放射治疗的敏感性。
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