【摘 要】
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目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对碘海醇引起人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的保护作用及机制.方法 将体外培养的HK-2细胞分为4组:对照组、碘海醇组、NAC组、NAC预处理+碘海醇共
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目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对碘海醇引起人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的保护作用及机制.方法 将体外培养的HK-2细胞分为4组:对照组、碘海醇组、NAC组、NAC预处理+碘海醇共作用组.用细胞增殖/毒性检测法(CCK-8)测定细胞存活率;核染色、Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;二氯二氢荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)荧光结合流式细胞法检测细胞内活性氧(ROS)的产生;免疫荧光(IF)、Western印迹法检测相关信号转导途径.结果 碘海醇呈剂量和时间依赖性诱导HK-2细胞凋亡,降低细胞存活率.碘海醇使细胞内ROS升高至对照组的1.3倍.NAC(5、10、15 mmol/L)预处理与碘海醇共作用后,HK-2细胞存活率分别增至104%、118%、130%,与碘海醇组(63%)差异有统计学意义(P＜0.05);凋亡率分别降为13.51%、13.46%、12.23%,与碘海醇组(24.41%)差异亦有统计学意义(P＜0.05);活性氧分别降为对照组的1.05、0.93、0.86倍,与碘海醇组(对照组的1.3倍)差异亦有统计学意义(P＜0.05).碘海醇作用于HK-2细胞,引起p53磷酸化,上调Bax,下调Bcl-2的表达,促进线粒体内细胞色素C(CytC)释放到胞质,进而引起半胱天冬氨酸蛋白酶(cagpage)-3活化,导致细胞凋亡.NAC降低细胞内ROS浓度,下调Bax表达,上调Bcl-2表达,减少cagpage-3活化,从而减轻细胞损伤.结论 碘海醇增加细胞内ROS生成,引起p53磷酸化.进而影响Bcl-2家族蛋自表达,促进CytC从线粒体释放和激活caspase-3信号通路,导致细胞凋亡.NAC通过清除氧自由基,降低细胞内ROS浓度,进而减轻碘海醇诱导的氧化应激所致细胞损伤及凋亡.
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