鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达、纯化与鉴定

• 作 者: 王德解 苗林 陈宏 李彦英 陈惠鹏 方宏清
• 机 构: 江西科技师范学院生命科学学院,军事医学科学院生物工程研究所,西北农林科技大学动物科技学院
• 出 处: 生物工程学报
• 发表日期: 2007年1期
• 关键词: 羧肽酶B 毕赤酵母 表达优化 蛋白纯化 carboxypeptidase B Pichia pastoris expression optimization
• 基金项目: 国家高技术研究与发展项目基金（No.2004AA215172）资助.

为了在毕赤酵母中表达鼠羧肽酶原B（procarboxypeptidase B，proCPB）蛋白，以RT-PCR法从SD鼠胰腺细胞中克隆了proCPB基因，将其插入pPIC9载体，PEG1000介导转入毕赤酵母GS115细胞，在甲醇的诱导下，实现了proCPB在毕赤酵母中的成功表达。通过发酵条件的优化，使用BMGY（pH6．0）培养基，添加0．5％的酪蛋白水解物，于28℃，在起始OD600达10．0时，每隔12h补加0．5％的甲醇，重组酵母GS115-proCPB表达的产物量可达到最高（500mg／L），