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摘要：目的：探讨喉鳞状细胞癌RECK基因甲基化状态与某种化疗敏感性的相关研究。方法：选取2014年5月-2015年7月期间在我院收治的60例喉鳞状细胞癌患者的临床资料作为观察组组，同时选择同一时期正常喉粘膜标本30例的RECK基因甲基化情况进行比较分析。观察组患者RECK基因甲基化状态与某种化疗敏感性的关系。结果：经过一段时间段的化疗，发现观察组化疗敏感度RECK基因甲基化水平明显低于对照组（p<0.05），差异具有统计学意义；RECK基因甲基化能够明显增高肿瘤未缓解患者的危险次数。结论：RECK基因甲基化状态是喉鳞状细胞癌重要参考依据，其化疗敏感性有一定的相关性。
关键词：喉鳞状细胞癌；RECK基因；甲基化状态；某种化疗敏感性
喉鳞状细胞癌是临床常见的一种恶性肿瘤，这种肿瘤的发生、发展是一个多基因参与的复杂过程。临床上对恶性肿瘤的治疗仍然没有特别有效的方式，而化疗是一种比较常见的辅助治疗方式。有关研究显示RECK基因表达下降与启动子区的甲基化具有重要的关系，DNA甲基化是由转移酶的激活引起，在肿瘤的发生、发展中具有重要的作用。并且DNA错配修复与外体培养的癌细胞对化疗敏感性有密切的关联性，本次研究主要分析喉鳞状细胞癌RECK基因甲基化状态与某种化疗敏感性的相关，并作如下报告。
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机选取2014年5月-2015年7月期间在我院收治的60例喉鳞状细胞癌患者的临床资料作为观察组组，同时选择同一时期正常喉粘膜标本30例的RECK基因甲基化情况进行比较分析，所有患者标本均经病理确诊。观察组患者中男36例，女24例，年龄35-68岁，平均年龄（40.36±0.36）岁；对照组患者中男18例，女12例。年龄31-65岁，平均年龄（41.25±1.24）岁；所有患者均灭有合并其他严重的恶性肿瘤。
1.2 方法
1.2.1 仪器和试剂
甲基化转移酶采用美国NEB公司生产的产品，高速离心机、扩增仪、凝胶自动成像仪以及电泳仪等采用美国公司生产产品；蛋白酶K采用北京艾比根生物技术公司生产的产品。
1.2.2 DNA的提取和回收
DNA提取方法采用标准蛋白酶K消化法进行提取，提取前做肿瘤细胞染色处理，然后选取喉癌细胞在75%以上区域提取DNA，将提取液放入离心管实施离心处理，然后加入蛋白酶K进行2h的培养在-20℃的地方保存备用。然后将这些液体加入230μL NH4HSO3后实施混匀处理，然后再使用漂洗液清洗1次；加入0.3mol/L的一氧化氮和乙醇混合物进行处理，并在室温下防止15min，离心洗净后放置在-20℃下保存。
1.2.3 甲基化RECK基因检测
RECK基因启动子DNA片段设计引物，发现上游引物为5’TTTGGGTGATTTAGTAGG3’；下游引物为5’TACCACAAACTACTAACATC ACTAAAC 3’。PCR反应体包含处理过的DNA 1μL，10×Buffer 2.5μL，2.5 mmol/L dNTP2μL，5 mmoL/L 上下引物各个含量酶，然后进行循环处理，电泳PCR产物，并实施切胶回收，挑取阳性克隆物进行测序处理。
2 结果
2.1 甲基化RECK基因与化疗敏感性比较
经过一段时间段的化疗，发现观察组化疗敏感度RECK基因甲基化水平明显低于对照组（p<0.05），差异具有统计学意义；RECK基因甲基化能够明显增高肿瘤未缓解患者的危险次数，见表1。
表1：甲基化RECK基因与化疗敏感性比较
3 讨论
启动子基因中与RNA聚合酶并启动转录的DNA序列，与转录起始点、控制转录水平以及其与转录的阻止特异性有一定的关系。抑癌基因失活与启动子高甲基化有关，能够较好的抑制肿瘤抑癌基因的沉默，从而阻碍基因转录表达。
目前，有较多研究显示甲基化RECK基因能够抑制肿瘤转移，它主要是通过抑制金属基质蛋白达到抑制肿瘤转移的作用。有关研究显示RECK基因水平与化疗效果具有一定的相关性。近年来抑癌基因甲基化对肿瘤的发生、发展、预后的关系越来受人们的重视，抑癌基因失活导致表达下降，而对话化疗癌细胞中RECK基因高于敏感组，本次研究结果显示，化疗敏感组的RECK基因甲基化率低于不敏感组，这主要是因为化疗的过程中刺激喉癌细胞中RECK基因表达，从而能够有效的抑制肿瘤细胞的分化，达到治疗的效果。而RECK基因甲基化能够降低RECK基因的表达，但是对抑制肿瘤分化方面的作用比较小。
目前从临床方面来看，化疗仍然是治疗肿瘤的重要首都单，化疗敏感性直接关系着肿瘤治疗效果，本次研究提示RECK基因甲基化水平与喉癌细胞化敏感性和预后有一定的关系，对早期预测喉癌细胞具有较好的诊断价值，提高喉癌细胞化疗敏感性对此病的诊断、治疗和预后重要的意义。总之，在后癌细胞中RECK基因甲基化状态与某种化疗敏感性有且密切的关系，然是仍然需要进一步的炎症和研究，确定这种你的准确性与有效性，促进喉癌控制效果的提高。
参考文献：
[1]陈小兵，马一杰，陈贝贝等.TIP30基因启动子甲基化与大肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性关系的研究[J].中国医药科学，2012，2（4）：14-16.
[2]安菊生.中晚期宫颈鳞状细胞癌同步放化疗敏感性相关基因的初步研究[D].中国协和医科大学，2008.
[3]崔静，李辉，卢琳琳等.喉鳞状细胞癌RECK基因甲基化状态与放疗敏感性的关系[J].中国肿瘤临床，2014，（5）：315-318.
[4]张霞，李晓冬， 赵健. 肠癌组织中TIP30 基因的表达与转移、预后间的关系及机制[J]. 第二军医大学学报，2005，26（5）：488-491.
[5]刘学奎，刘志民，刘巍巍，等.声门型喉癌CO2激光手术治疗后局部复发与前联合受侵犯的关系[J].中国肿瘤临床，2012，39（22）：1810-1813.
关键词：喉鳞状细胞癌；RECK基因；甲基化状态；某种化疗敏感性
喉鳞状细胞癌是临床常见的一种恶性肿瘤，这种肿瘤的发生、发展是一个多基因参与的复杂过程。临床上对恶性肿瘤的治疗仍然没有特别有效的方式，而化疗是一种比较常见的辅助治疗方式。有关研究显示RECK基因表达下降与启动子区的甲基化具有重要的关系，DNA甲基化是由转移酶的激活引起，在肿瘤的发生、发展中具有重要的作用。并且DNA错配修复与外体培养的癌细胞对化疗敏感性有密切的关联性，本次研究主要分析喉鳞状细胞癌RECK基因甲基化状态与某种化疗敏感性的相关，并作如下报告。
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机选取2014年5月-2015年7月期间在我院收治的60例喉鳞状细胞癌患者的临床资料作为观察组组，同时选择同一时期正常喉粘膜标本30例的RECK基因甲基化情况进行比较分析，所有患者标本均经病理确诊。观察组患者中男36例，女24例，年龄35-68岁，平均年龄（40.36±0.36）岁；对照组患者中男18例，女12例。年龄31-65岁，平均年龄（41.25±1.24）岁；所有患者均灭有合并其他严重的恶性肿瘤。
1.2 方法
1.2.1 仪器和试剂
甲基化转移酶采用美国NEB公司生产的产品，高速离心机、扩增仪、凝胶自动成像仪以及电泳仪等采用美国公司生产产品；蛋白酶K采用北京艾比根生物技术公司生产的产品。
1.2.2 DNA的提取和回收
DNA提取方法采用标准蛋白酶K消化法进行提取，提取前做肿瘤细胞染色处理，然后选取喉癌细胞在75%以上区域提取DNA，将提取液放入离心管实施离心处理，然后加入蛋白酶K进行2h的培养在-20℃的地方保存备用。然后将这些液体加入230μL NH4HSO3后实施混匀处理，然后再使用漂洗液清洗1次；加入0.3mol/L的一氧化氮和乙醇混合物进行处理，并在室温下防止15min，离心洗净后放置在-20℃下保存。
1.2.3 甲基化RECK基因检测
RECK基因启动子DNA片段设计引物，发现上游引物为5’TTTGGGTGATTTAGTAGG3’；下游引物为5’TACCACAAACTACTAACATC ACTAAAC 3’。PCR反应体包含处理过的DNA 1μL，10×Buffer 2.5μL，2.5 mmol/L dNTP2μL，5 mmoL/L 上下引物各个含量酶，然后进行循环处理，电泳PCR产物，并实施切胶回收，挑取阳性克隆物进行测序处理。
2 结果
2.1 甲基化RECK基因与化疗敏感性比较
经过一段时间段的化疗，发现观察组化疗敏感度RECK基因甲基化水平明显低于对照组（p<0.05），差异具有统计学意义；RECK基因甲基化能够明显增高肿瘤未缓解患者的危险次数，见表1。
表1：甲基化RECK基因与化疗敏感性比较
3 讨论
启动子基因中与RNA聚合酶并启动转录的DNA序列，与转录起始点、控制转录水平以及其与转录的阻止特异性有一定的关系。抑癌基因失活与启动子高甲基化有关，能够较好的抑制肿瘤抑癌基因的沉默，从而阻碍基因转录表达。
目前，有较多研究显示甲基化RECK基因能够抑制肿瘤转移，它主要是通过抑制金属基质蛋白达到抑制肿瘤转移的作用。有关研究显示RECK基因水平与化疗效果具有一定的相关性。近年来抑癌基因甲基化对肿瘤的发生、发展、预后的关系越来受人们的重视，抑癌基因失活导致表达下降，而对话化疗癌细胞中RECK基因高于敏感组，本次研究结果显示，化疗敏感组的RECK基因甲基化率低于不敏感组，这主要是因为化疗的过程中刺激喉癌细胞中RECK基因表达，从而能够有效的抑制肿瘤细胞的分化，达到治疗的效果。而RECK基因甲基化能够降低RECK基因的表达，但是对抑制肿瘤分化方面的作用比较小。
目前从临床方面来看，化疗仍然是治疗肿瘤的重要首都单，化疗敏感性直接关系着肿瘤治疗效果，本次研究提示RECK基因甲基化水平与喉癌细胞化敏感性和预后有一定的关系，对早期预测喉癌细胞具有较好的诊断价值，提高喉癌细胞化疗敏感性对此病的诊断、治疗和预后重要的意义。总之，在后癌细胞中RECK基因甲基化状态与某种化疗敏感性有且密切的关系，然是仍然需要进一步的炎症和研究，确定这种你的准确性与有效性，促进喉癌控制效果的提高。
参考文献：
[1]陈小兵，马一杰，陈贝贝等.TIP30基因启动子甲基化与大肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性关系的研究[J].中国医药科学，2012，2（4）：14-16.
[2]安菊生.中晚期宫颈鳞状细胞癌同步放化疗敏感性相关基因的初步研究[D].中国协和医科大学，2008.
[3]崔静，李辉，卢琳琳等.喉鳞状细胞癌RECK基因甲基化状态与放疗敏感性的关系[J].中国肿瘤临床，2014，（5）：315-318.
[4]张霞，李晓冬， 赵健. 肠癌组织中TIP30 基因的表达与转移、预后间的关系及机制[J]. 第二军医大学学报，2005，26（5）：488-491.
[5]刘学奎，刘志民，刘巍巍，等.声门型喉癌CO2激光手术治疗后局部复发与前联合受侵犯的关系[J].中国肿瘤临床，2012，39（22）：1810-1813.