【摘 要】
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目的:建立小鼠骨髓源耐受性树突状细胞(CD11b+F4/80+TDCs)体外培养及功能鉴定方法。方法:以重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组白介素4(rmIL-4)体外诱导小
【机 构】
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安徽医科大学临床药理研究所,抗炎免疫药物教育部重点实验室,
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目的:建立小鼠骨髓源耐受性树突状细胞(CD11b+F4/80+TDCs)体外培养及功能鉴定方法。方法:以重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组白介素4(rmIL-4)体外诱导小鼠骨髓细胞分化为未成熟树突细胞(iDCs),收集第六天的细胞采用流式细胞术分离纯化CD11b+F4/80+TDCs。倒置显微镜动态观察细胞形态学变化,流式细胞术观察并分选CD11b+F4/80+TDCs,CD11b+F4/80+TDCs的耐受功能通过MHCⅡ类分子、CD83、IDO、TLR-2的表达及IL-10和TGF-β1细胞因子的产生进行评价。流式细胞术测定MHCⅡ类分子表达,免疫组化法测定CD83、IDO、TLR-2的表达,ELISA法测定IL-10和TGF-β1的水平,同时设LPS刺激诱导的成熟树突细胞(mDCs)作对照。结果:镜下可见新鲜分离的骨髓细胞呈圆形,体积小,2 d后,部分细胞形态发生改变,体积增大,细胞聚集成团,培养5~6 d,细胞集落增多,形态不规则。同时表面出现较多毛刺样突起。CD11b+F4/80+TDCs含量在23%左右,经流式分选后细胞纯度达到99%以上。与mDCs比较,CD11b+F4/80+TDCs低表达MHCⅡ和CD83,高表达IDO、TLR-2,并分泌IL-10和TGF-β1。结论:用小鼠rmGM-CSF和rmIL-4体外能成功诱导小鼠骨髓源CD11b+F4/80+TDCs,并且CD11b+F4/80+TDCs通过表达IL-10、TGF-β1、IDO和TLR-2显示耐受功能。
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