携带p53基因的重组1型单纯疱疹病毒溶瘤特性的实验观察

• 作 者: 王雪莹 朱慧 汪习 刘晓娟 马正海
• 机 构: 830046 乌鲁木齐，新疆大学生命科学与技术学院 新疆生物资源基因工程国家重点实验室,830046 乌鲁木齐，新疆大学生命科学与技术学院 新疆生物资源基因工程国家重点实验室,830046 乌鲁木齐，
• 出 处: 中华医学杂志
• 发表日期: 2016年96期
• 关键词: 疱疹病毒1型 人 染色体 人工 细菌 基因 p53 溶瘤病毒

目的

利用同源重组技术获得插入p53基因的重组1型单纯疱疹病毒(HSV-1)，并在体外培养细胞和荷瘤小鼠中研究其溶瘤特性。

方法

将含p53基因的真核表达框克隆入含HSV-1同源重组臂的pKO5/BN，获得重组穿梭质粒pKO5/p53，其电转含pHSV_ΔIR-BAC的大肠杆菌后，筛选获得含有p53的重组DNA pHSV_ΔIR-BAC/p53。pHSV_ΔIR-BAC/p53转染Vero细胞获得重组病毒，经Southern印迹和Western印迹鉴定正确后命名为MH1004。分别检测MH1004感染多种肿瘤细胞24 h后的滴度，分析其在肿瘤细胞中的复制特性。建立小鼠黑色素瘤模型，于0、3、6 d瘤内分别注射2×10⁶ PFU的MH1004、未插入p53基因的重组HSV-1(MH1001)、HSV-1 wt和PBS，观察肿瘤大小和小鼠生存时间并作统计学分析。

结果

Western印迹检测表明MH1004所携带的p53基因可在感染细胞中表达；在同种肿瘤细胞中，MH1004和HSV-1 wt的复制水平差异无统计学意义(P> 0.05)；MH1004在SK-N-SH和U251细胞中的复制水平显著高于其在其他肿瘤细胞中的复制水平；治疗15 d后，HSV-1 wt、MH1001和MH1004组小鼠的肿瘤体积分别为(6 180±751)、(5 760±267)和(4 850±532) mm³，显著小于PBS对照组(9 860±91) mm³(均P<0.01)，MH1004组肿瘤体积小于MH1001组和HSV-1 wt组，但差异均无统计学意义(均P>0.05)。MH1004组小鼠生存率(5/6)显著高于PBS组(3/6)、HSV-1 wt组(3/6)和MH1001组(3/6)。

结论

MH1004在神经肿瘤细胞中的复制水平较高，能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，并延长荷瘤小鼠的生存期。