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【摘 要】 目的：建立黎辣根的质量标准。方法：采集来自阳江的7批次黎辣根饮片，参考《中药大辞典》（下册）和《中华人民共和国药典》（一部）等，对黎辣根的质量控制方法进行研究，包括植物形态与药材性状、显微鉴别、薄层色谱鉴别和含量测定的研究。结果：7批次黎辣根样品的植物形态与药材性状特征相似，显微特征明显;薄层色谱斑点清晰、分离度好;高效液相含量测定专属性强，分离度和重复性好。结论：本研究方法准确可靠、重复性好，创新性强，可用于黎辣根的质量控制。
【关键词】 黎辣根;显微鉴别;薄层色谱鉴别;含量测定
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）17-0045-04
Abstract：objective To establish the quality standards of li horseradish.Methods Collected from 7 batches in yangjiang horseradish yinpian， refer to the dictionary of Chinese medicine and the law of the Peoples Republic of China pharmacopoeia （book1&book 2） （a）， the quality control method for study of li horseradish， including plant morphology and medicinal properties， microscopic identification， TLC identification and content determination of research.Results In 7 batches of horseradish similar samples of plants with medicinal properties characteristics， microscopic characteristics of the obvious; TLC spots were clear， good separating degree; High performance liquid content determination of specific， separating degree and repeatability.Conclusion This study method is accurate and reliable， good repeatability， innovative is strong， can be used for quality control of li horseradish.
Key words：Li horseradish;Microscopic Identification;TLC Identification;Content Determination
黎辣根Rhamnus crenata Sieb.et Zucc.是鼠李科鼠李屬植物长叶冻绿的根，又名钝叶鼠李根[1] 、长叶鼠李根[1] 、苦李根、黎罗根[2]，黎辣根具有清热利湿、杀虫解毒的作用，临床上治疗疥疮疔疮、癞癣、麻风、蛔虫病等症状。有文献收载其植物形态图[2]，但没有其药材性状、饮片性状、显微鉴别、薄层色谱鉴别以及含量测定记载。本研究对黎辣根进行质量标准研究，现将结果报告如下。
1 仪器与材料
1.1 仪器 DIONEX UltiMate 3000型高效液相色谱仪，水浴锅，电子天平及各种玻璃仪器。
1.2 材料 黎辣根饮片购买于阳江市江城区杏春药店，取其干燥根粉碎（过40目药典筛），测得其水分为12.5%。
2 植物形态与药材性状
2.1 植物形态[1] 为落叶灌木或小乔木。高7m。幼枝带红色，被毛，后脱落。叶互生，叶柄长4～12cm，被密柔毛。倒卵状椭圆形、披针状椭圆形或倒卵形，长4～14cm，宽2～5cm，先端渐尖或短急尖，基部楔形或钝，边缘具锯齿，上面无毛，下面被柔毛或沿脉被柔毛。聚伞花序腋生，总花梗长4～15mm，被柔毛;花单性，异株，淡绿色或紫色;花萼5裂，裂片三角形与萼管等长，外面有微毛;花瓣5，近圆形，先端2裂;雄蕊5，与花瓣等长;子房上位，球形，无毛，3室，花柱不分裂，柱头不明显。核果球形，成熟时黑色或紫黑色，长5～6mm。种子青灰色，无沟。花期5～8月，果期8～10月。见图a 植物形态图（幼苗）和图b 植物形态图。
2.2 药材性状 外表面棕褐色或黄褐色。有棕皱纹及横裂纹。断面皮部粗糙，黄褐色;木部黄色或淡黄色。质坚硬，不易折断。见图c黎辣根药材和图d 黎辣根饮片。
3 显微鉴别
3.1 根粉末显微特征 石细胞长梭形，密集成团，胞腔狭小，纹孔明显，见图e;红棕色块类圆形，重叠集结成团状，见图f。
3.2 根横切面显微特征 根皮部含有较多红棕色团块，见图f;木质部细胞类圆形，放射状排列，髓部不明显，见图g。
3.3 茎粉末显微特征 纤维成束，绳状，纤维束上嵌有密集的草酸钙方晶，形成晶纤维，见图h;石细胞成群，壁厚，胞腔细小，纹孔明显，见图i。
4 薄层鉴别
取本品粉末2g，加甲醇60mL，40℃加热回流45min，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液10mL，水浴加热30min，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次10mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，即得供试品溶液。分别取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的溶液，即得对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）[3]试验，分别吸取供试品溶液5μL、大黄素对照品和大黄素甲醚对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下观察，结果见图j。另置于氨蒸气中熏后，斑点变为红色，结果见图k。 5 含量测定
5.1 色谱条件 与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.1%磷酸溶液（80∶20）为流动相，流速：lmL/min;检测波长为254nm;柱温：30℃。
5.2 对照品溶液的制备 分别精密称取大黄素10.63mg，加甲醇溶解，使配成每1mL含大黄素20μg的对照品溶液，即得。
5.3 供试品溶液的制备 精密称取3批粉碎过40目药典筛的黎辣根粉末各2g，分别加入甲醇20mL，40℃水浴加热回流提取45min，过滤，滤液蒸干，用甲醇适量使溶解，移至10mL容量瓶，过0.45μL微孔滤膜，即得。
5.4 线性关系 考察分别精密吸取同一对照品溶液8.504μg/mL、17.008μg/mL、25.512μg/mL、34.016μg/mL、42.520μg/mL，注入液相色谱仪中，测定峰面积。以大黄素对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为y=3.7079X，r=0.999（n=5）。表明大黄素对照品线性关系良好，结果见表2、图L。
5.5 精密度試验 取同一对照品溶液，重复进样6次，每次10μL，测定大黄素峰面积，测定结果RSD=0.62%，表明该方法精密度良好，结果见表3。
5.6 重复性试 验取同一批号供试品，按供试品溶液制备方法制备6份供试液。按照正文含量测定方法，测定每份样品中大黄素的含量，结果RSD=1.71%（n=6），表明该方法重复性良好，结果见表4。
取精密度试验的对照品测得的结果参与重复性试验的计算，结果见表5。
5.7 稳定性试验 以选定浓度（mg/mL）为准的供试溶液， 分别在0、1、2、4、6h时间段内测定峰面积。
5.8 加样回收率 试验取已知含量为0.64mg/g的黎辣根，打成细粉（过3号筛），取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，共6份，再分别精密加入大黄素对照品溶液（溶剂为甲醇溶液，浓度为0.6505mg/mL）2.5mL，称定重量，然后按正文含量测定方法供试品溶液制备项下的方法操作测定，记录色谱图，考察本方法的加样回收率，加样回收率为97.9%，RSD为0.31%，表明该方法回收率良好。结果见表6。
5.9 样品含量测定
5.9.1 测定 分别吸取3批供试品溶液和大黄素对照品溶液各5μL，注入高效液相色谱仪中，测定，计算，即得。
5.9.2 结果 3批黎辣根大黄素的含量分别为0.4216mg/g、0.4290 mg/g、0.4285mg/g。
6 讨 论
薄层色谱斑点清晰、分离度好;高效液相含量测定专属性强，分离度和重复性好。通过试验研究，确定以甲醇为溶剂，40℃水浴加热回流提取45min为含量测定中最优的样品提取方法。本研究方法准确可靠、重复性好，创新性强，可用于黎辣根的质量控制。
参考文献
[1]南京中医药大学.中药大辞典（下册）[M].2版.上海：上海科技出版社，2005：12.
[2]《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编彩色图谱[M].北京：人民卫生出版社，1974：137.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：208-209.
（收稿日期：2020-04-08 编辑：程鹏飞）
【关键词】 黎辣根;显微鉴别;薄层色谱鉴别;含量测定
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）17-0045-04
Abstract：objective To establish the quality standards of li horseradish.Methods Collected from 7 batches in yangjiang horseradish yinpian， refer to the dictionary of Chinese medicine and the law of the Peoples Republic of China pharmacopoeia （book1&book 2） （a）， the quality control method for study of li horseradish， including plant morphology and medicinal properties， microscopic identification， TLC identification and content determination of research.Results In 7 batches of horseradish similar samples of plants with medicinal properties characteristics， microscopic characteristics of the obvious; TLC spots were clear， good separating degree; High performance liquid content determination of specific， separating degree and repeatability.Conclusion This study method is accurate and reliable， good repeatability， innovative is strong， can be used for quality control of li horseradish.
Key words：Li horseradish;Microscopic Identification;TLC Identification;Content Determination
黎辣根Rhamnus crenata Sieb.et Zucc.是鼠李科鼠李屬植物长叶冻绿的根，又名钝叶鼠李根[1] 、长叶鼠李根[1] 、苦李根、黎罗根[2]，黎辣根具有清热利湿、杀虫解毒的作用，临床上治疗疥疮疔疮、癞癣、麻风、蛔虫病等症状。有文献收载其植物形态图[2]，但没有其药材性状、饮片性状、显微鉴别、薄层色谱鉴别以及含量测定记载。本研究对黎辣根进行质量标准研究，现将结果报告如下。
1 仪器与材料
1.1 仪器 DIONEX UltiMate 3000型高效液相色谱仪，水浴锅，电子天平及各种玻璃仪器。
1.2 材料 黎辣根饮片购买于阳江市江城区杏春药店，取其干燥根粉碎（过40目药典筛），测得其水分为12.5%。
2 植物形态与药材性状
2.1 植物形态[1] 为落叶灌木或小乔木。高7m。幼枝带红色，被毛，后脱落。叶互生，叶柄长4～12cm，被密柔毛。倒卵状椭圆形、披针状椭圆形或倒卵形，长4～14cm，宽2～5cm，先端渐尖或短急尖，基部楔形或钝，边缘具锯齿，上面无毛，下面被柔毛或沿脉被柔毛。聚伞花序腋生，总花梗长4～15mm，被柔毛;花单性，异株，淡绿色或紫色;花萼5裂，裂片三角形与萼管等长，外面有微毛;花瓣5，近圆形，先端2裂;雄蕊5，与花瓣等长;子房上位，球形，无毛，3室，花柱不分裂，柱头不明显。核果球形，成熟时黑色或紫黑色，长5～6mm。种子青灰色，无沟。花期5～8月，果期8～10月。见图a 植物形态图（幼苗）和图b 植物形态图。
2.2 药材性状 外表面棕褐色或黄褐色。有棕皱纹及横裂纹。断面皮部粗糙，黄褐色;木部黄色或淡黄色。质坚硬，不易折断。见图c黎辣根药材和图d 黎辣根饮片。
3 显微鉴别
3.1 根粉末显微特征 石细胞长梭形，密集成团，胞腔狭小，纹孔明显，见图e;红棕色块类圆形，重叠集结成团状，见图f。
3.2 根横切面显微特征 根皮部含有较多红棕色团块，见图f;木质部细胞类圆形，放射状排列，髓部不明显，见图g。
3.3 茎粉末显微特征 纤维成束，绳状，纤维束上嵌有密集的草酸钙方晶，形成晶纤维，见图h;石细胞成群，壁厚，胞腔细小，纹孔明显，见图i。
4 薄层鉴别
取本品粉末2g，加甲醇60mL，40℃加热回流45min，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液10mL，水浴加热30min，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次10mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，即得供试品溶液。分别取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的溶液，即得对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）[3]试验，分别吸取供试品溶液5μL、大黄素对照品和大黄素甲醚对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下观察，结果见图j。另置于氨蒸气中熏后，斑点变为红色，结果见图k。 5 含量测定
5.1 色谱条件 与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.1%磷酸溶液（80∶20）为流动相，流速：lmL/min;检测波长为254nm;柱温：30℃。
5.2 对照品溶液的制备 分别精密称取大黄素10.63mg，加甲醇溶解，使配成每1mL含大黄素20μg的对照品溶液，即得。
5.3 供试品溶液的制备 精密称取3批粉碎过40目药典筛的黎辣根粉末各2g，分别加入甲醇20mL，40℃水浴加热回流提取45min，过滤，滤液蒸干，用甲醇适量使溶解，移至10mL容量瓶，过0.45μL微孔滤膜，即得。
5.4 线性关系 考察分别精密吸取同一对照品溶液8.504μg/mL、17.008μg/mL、25.512μg/mL、34.016μg/mL、42.520μg/mL，注入液相色谱仪中，测定峰面积。以大黄素对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为y=3.7079X，r=0.999（n=5）。表明大黄素对照品线性关系良好，结果见表2、图L。
5.5 精密度試验 取同一对照品溶液，重复进样6次，每次10μL，测定大黄素峰面积，测定结果RSD=0.62%，表明该方法精密度良好，结果见表3。
5.6 重复性试 验取同一批号供试品，按供试品溶液制备方法制备6份供试液。按照正文含量测定方法，测定每份样品中大黄素的含量，结果RSD=1.71%（n=6），表明该方法重复性良好，结果见表4。
取精密度试验的对照品测得的结果参与重复性试验的计算，结果见表5。
5.7 稳定性试验 以选定浓度（mg/mL）为准的供试溶液， 分别在0、1、2、4、6h时间段内测定峰面积。
5.8 加样回收率 试验取已知含量为0.64mg/g的黎辣根，打成细粉（过3号筛），取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，共6份，再分别精密加入大黄素对照品溶液（溶剂为甲醇溶液，浓度为0.6505mg/mL）2.5mL，称定重量，然后按正文含量测定方法供试品溶液制备项下的方法操作测定，记录色谱图，考察本方法的加样回收率，加样回收率为97.9%，RSD为0.31%，表明该方法回收率良好。结果见表6。
5.9 样品含量测定
5.9.1 测定 分别吸取3批供试品溶液和大黄素对照品溶液各5μL，注入高效液相色谱仪中，测定，计算，即得。
5.9.2 结果 3批黎辣根大黄素的含量分别为0.4216mg/g、0.4290 mg/g、0.4285mg/g。
6 讨 论
薄层色谱斑点清晰、分离度好;高效液相含量测定专属性强，分离度和重复性好。通过试验研究，确定以甲醇为溶剂，40℃水浴加热回流提取45min为含量测定中最优的样品提取方法。本研究方法准确可靠、重复性好，创新性强，可用于黎辣根的质量控制。
参考文献
[1]南京中医药大学.中药大辞典（下册）[M].2版.上海：上海科技出版社，2005：12.
[2]《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编彩色图谱[M].北京：人民卫生出版社，1974：137.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：208-209.
（收稿日期：2020-04-08 编辑：程鹏飞）