体外重组CaV1.2不同蛋白片段纯化及其与CaM相互作用的研究

• 作 者: 何桂林 邵冬雪 印丹丹 胡慧媛 郭凤 王红梅 郝
• 机 构: 中国医科大学药学院药物毒理教研室,江西省人民医院药剂科
• 出 处: 中国医科大学学报
• 发表日期: 2013年09期
• 关键词: GST pull-down assay CaV1.2 CaM 融合蛋白
• 基金项目: 国家自然科学基金(30870907;31071004;81100108;81001429)

目的纯化CaV1.2不同蛋白片段并研究其与CaM的相互作用。方法质粒转化、筛选得到转化成功BL21菌株,利用IPTG诱导GST钙通道融合蛋白表达,Glutathione-Sepharose 4B beads纯化钙通道不同蛋白片段;采用GST pull-down assay实验研究钙通道蛋白不同片段与CaM以及突变体的相互作用。结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得钙通道不同蛋白片段;GST pull-down assay结果显示CT1可与CaM及突变体结合,且GST-CT1与野生型CaM结合量显著多于与突变体CaM结合量。结论成功纯化CaV1.2钙通道蛋白片段并顺利完成GST pull-down assay实验,为深入研究蛋白相互作用或发现新的蛋白相互作用奠定了基础。