【摘 要】
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目的克隆小鼠耳蜗组织神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT3)基因,并转染该基因至体外培养的T淋巴细胞系的Jurkat细胞,建立能够表达和分泌NT3的基因工程细胞模型,为后续体内应
【机 构】
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第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科,第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室
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目的克隆小鼠耳蜗组织神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT3)基因,并转染该基因至体外培养的T淋巴细胞系的Jurkat细胞,建立能够表达和分泌NT3的基因工程细胞模型,为后续体内应用作准备.方法用反转录PCR方法扩增NT3基因,定向克隆入测序载体pUC19.酶切和测序鉴定正确后,再以pUC19-NT3质粒为模板,通过PCR方法得到上下游能够与pCDNA3载体中酶切位点匹配的NT3片段,进一步克隆获得pCDNA3-NT3质粒.酶切鉴定正确的质粒经阳离子脂质体包埋转染入Jurkat细胞,通过G4
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