【摘 要】
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目的:构建携带HIV-1 Vpr基因的重组腺病毒.方法:采用限制性内切酶消化和T4 DNA连接酶连接的方法,将Vpr基因克隆至腺病毒穿梭质粒pTrack-C上,然后通过重组穿梭质粒pTrack-C-Vp
【机 构】
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天津医科大学一中心临床学院神经外科,南开大学医学院,卫生部危重病急救医学重点实验室
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目的:构建携带HIV-1 Vpr基因的重组腺病毒.方法:采用限制性内切酶消化和T4 DNA连接酶连接的方法,将Vpr基因克隆至腺病毒穿梭质粒pTrack-C上,然后通过重组穿梭质粒pTrack-C-Vpr和腺病毒骨架质粒pAdeno体外LR位点特异性重组的方法,将Vpr基因转移至腺病毒骨架质粒pAdeno上,最后重组骨架质粒pAdeno-Vpr鉴定正确后经Pacl酶切,转染HEK 293细胞,包装成重组腺病毒rAd5-Vpr.同时在HEK 293细胞中进行病毒扩增,利用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用微量全细胞病变法检测病毒滴度.结果:PCR鉴定重组腺病毒rAd5-Vpr构建成功;扩增后检测病毒滴度约为5×108PFU/mL.结论:应用LR重组法能成功构建携带HIV-1 Vpr基因的重组腺病毒,扩增后滴度能满足实验需要,为进一步相关研究的开展奠定了基础.
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