【摘 要】
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为寻找纤维化形成中调控人Ⅰ型前胶原基因高水平转录的启动序列及其DNA结合蛋白,以人皮肤成纤维细胞α1(Ⅰ)前胶原基因转录起始点上游-2.5kb至+42 bp的片段为靶序列,采用PCR
【机 构】
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第二军医大学附属长征医院全军医学免疫中心
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为寻找纤维化形成中调控人Ⅰ型前胶原基因高水平转录的启动序列及其DNA结合蛋白,以人皮肤成纤维细胞α1(Ⅰ)前胶原基因转录起始点上游-2.5kb至+42 bp的片段为靶序列,采用PCR、基因重组、报告基因测活、细胞基因转染技术比较不同长短启动子活性.凝胶滞留实验(EM-SA)研究高启动活性片段相应的DNA结合蛋白.基因转染高活性转录因子识别序列至靶细胞,探讨前胶原基因激活阻断的新手段.结果表明,-2 483~+42 bp、-268~+42 bp序列具有强启动调控活性,而-105~+42 bp片段启动活性最低.EMSA对高启动活性小片段DNA结合蛋白的分析提示,-268~+42 bp序列中存在转录因子Ap-1、Sp-1、NF-1的特异结合位点.转染高活性转录因子识别序列Ap-1、Sp-1至靶细胞可竞争性阻断胶原基因启动转录激活.研究提示,人α1(Ⅰ)前胶原基因-2 483~+42 bp-268~+42 bp片段有高启动活性.转录因子Ap-1、Sp-1、NF-1与-268~+42bp序列中相应识别序列的结合与其基础高转录活性有关.转染高活性转录因子识别序列Ap-1、Sp-1 可从转录水平阻断胶原基因的激活.
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