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摘 要：本文采用高校液相测定了不同储存期金银花中2种药效组分的的含量，流动相：0.5%冰乙酸-乙腈，线性梯度洗脱：0～20min（90∶10～78∶22），20～35min（78∶22～76∶24），35～37min（76∶24～65∶35），37～40min（65∶35～90∶10）;固定相为：思普乐C18液相色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），检测波长为327nm和350nm;此方法简便、准确、重现性好，可用于不同储存期金银花中2种药效组分的测定。
关键词：金银花;高效液相;含量
金银花为忍冬科植物山银花Lonicara confusa DC.的花蕾或带初开的花。《品汇精要》记载：“金银花，三月开花，五出，微香，蒂带红色，花初开则色白，经一、二日则色黄，故名金银花。”金银花既能宣散风热，还善清解血毒。木犀草苷和绿原酸具有抗炎、抑菌的作用[1-3]。本文采用高校液相测定了不同储存期金银花中2种药效组分的的含量。
1 仪器与试药
HD-7高灵敏度紫外检测仪（青浦沪西紫外分析儀）;泽权Zealpure Classic超纯水机（上海泽权仪器设备有限公司）;GY-50高温循环油浴（西安禾普生物科技有限公司）;SPR-BW200液相色谱进样瓶专用洗瓶机（杭州亚莱博仪器有限公司）;SB-80超声波清洗机（南京以马内利仪器设备有限公司）。绿原酸和木犀草苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（山西优伦多生物科技有限公司）、磷酸（山西优伦多生物科技有限公司）、磷酸二氢钾（德州锐特化工有限公司）、甲醇（四川华源盛泰生物科技有限公司）、甲酸（四川华源盛泰生物科技有限公司）、冰醋酸（四川华源盛泰生物科技有限公司）、三乙胺（四川华源盛泰生物科技有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果[4-6]，确定色谱条件如下。色谱柱为思普乐C18液相色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）;.5%冰乙酸-乙腈，线性梯度洗脱：0～20min（90∶10～78∶22），20～35min（78∶22～76∶24），35～37min（76∶24～65∶35），37～40min（65∶35～90∶10）为流动相;检测波长为327nm和350nm;流速1.0mL·min-1;柱温：30℃。理论板数按木犀草苷峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
精密量取金银花适量，置于容量瓶内，精密加人50%甲醇10ml，超声处理30分钟，放冷，过滤，定容至25毫升容量瓶内，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸和木犀草苷对照品适量，加流动相制成每1mL含绿原酸200μg和木犀草苷20μg的溶液，即得。
2.4 标准曲线的制备
分别精密称取绿原酸、木犀草苷对照品50.0mg、5.0mg，置25ml容量瓶中，加入流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.5、1、2、3、4、5mL，置于10mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。依照色谱条件测定，以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，绿原酸在100～1000μg·mL-1范围内呈良好的线性关系;木犀草苷在10～100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，分别精密吸取绿原酸和木犀草苷对照品溶液重复测定6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD分别为0.83%和0.86%。结果表明，本实验精密度良好。
2.6 重现性试验
分别量取样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值，RSD值为0.75%，0.81%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.7 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2小时进样测定，供试品绿原酸和木犀草苷峰面积的RSD分别为0.71%和0.76%。结果表明样品溶液至少在2小时内稳定。
2.8 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的绿原酸和木犀草苷对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.3%和99.5%，RSD分别为0.86%和0.83%。
2.9 不同储存期金银花中2种药效组分的含量
3 讨论
分别考察乙腈-0.1%磷酸溶液（60：40），甲醇-0.1%磷酸（70：30），乙腈一水一甲酸（17：80：0.5），甲醇-0.1moloL-1磷酸二氢钾-三乙胺 （60∶40：0.01），甲醇-0.1moloL-1磷酸二氢钾-三乙胺 （50∶50：0.01），乙腈-0.1%磷酸溶液（50：50），5%冰乙酸-乙腈，线性梯度洗脱，乙腈-磷酸-0.1moloL-1磷酸二氢钾 （40∶0.01：60）不同比例的流动相，结果以5%冰乙酸-乙腈，线性梯度洗脱为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用5%冰乙酸-乙腈，线性梯度洗脱为流动相。金银花在储存过程中含量有所下降，但储存24个月的金银花还符合药典标准。
参考文献
[1]Lou Zaixiang，Wang Hongxin，Zhu Song，Ma Chaoyang，Wang Zhouping. Antibacterial activity and mechanism of action of chlorogenic acid. Journal of food science，2012.
[2]李惠香，张倩，柳亚男，刘攀，王丽莹，李丹娜，邱峰，赵烽.木犀草素与木犀草苷的抗炎活性对比研究[J].烟台大学学报（自然科学与工程版），2018（02）.
[3]管仁伟，曲永胜，顾正位，邵新，林慧彬，林建强.木犀草苷的药理作用研究[J].中国野生植物资源，2014（01）.
[4]张元元，李进，陈涛，李凤丽.高效液相色谱法同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量[J].天津中医药大学学报，2011（02）.
[5]李云贵，李冲，文翔昊，鲁启明，郭露.高效液相色谱测定小儿肺热咳喘口服液中绿原酸与木犀草苷的含量[J].中南医学科学杂志，2013（04）.
[6]舒翔，叶小春，陈军，刘敏，徐宏峰，林世和，谢岱，余南才，刘新国.高效液相色谱法同时测定夜香牛颗粒中绿原酸和木犀草苷的含量[J].中国医院药学杂志，2018（18）.
关键词：金银花;高效液相;含量
金银花为忍冬科植物山银花Lonicara confusa DC.的花蕾或带初开的花。《品汇精要》记载：“金银花，三月开花，五出，微香，蒂带红色，花初开则色白，经一、二日则色黄，故名金银花。”金银花既能宣散风热，还善清解血毒。木犀草苷和绿原酸具有抗炎、抑菌的作用[1-3]。本文采用高校液相测定了不同储存期金银花中2种药效组分的的含量。
1 仪器与试药
HD-7高灵敏度紫外检测仪（青浦沪西紫外分析儀）;泽权Zealpure Classic超纯水机（上海泽权仪器设备有限公司）;GY-50高温循环油浴（西安禾普生物科技有限公司）;SPR-BW200液相色谱进样瓶专用洗瓶机（杭州亚莱博仪器有限公司）;SB-80超声波清洗机（南京以马内利仪器设备有限公司）。绿原酸和木犀草苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（山西优伦多生物科技有限公司）、磷酸（山西优伦多生物科技有限公司）、磷酸二氢钾（德州锐特化工有限公司）、甲醇（四川华源盛泰生物科技有限公司）、甲酸（四川华源盛泰生物科技有限公司）、冰醋酸（四川华源盛泰生物科技有限公司）、三乙胺（四川华源盛泰生物科技有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果[4-6]，确定色谱条件如下。色谱柱为思普乐C18液相色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）;.5%冰乙酸-乙腈，线性梯度洗脱：0～20min（90∶10～78∶22），20～35min（78∶22～76∶24），35～37min（76∶24～65∶35），37～40min（65∶35～90∶10）为流动相;检测波长为327nm和350nm;流速1.0mL·min-1;柱温：30℃。理论板数按木犀草苷峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
精密量取金银花适量，置于容量瓶内，精密加人50%甲醇10ml，超声处理30分钟，放冷，过滤，定容至25毫升容量瓶内，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸和木犀草苷对照品适量，加流动相制成每1mL含绿原酸200μg和木犀草苷20μg的溶液，即得。
2.4 标准曲线的制备
分别精密称取绿原酸、木犀草苷对照品50.0mg、5.0mg，置25ml容量瓶中，加入流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.5、1、2、3、4、5mL，置于10mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。依照色谱条件测定，以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，绿原酸在100～1000μg·mL-1范围内呈良好的线性关系;木犀草苷在10～100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，分别精密吸取绿原酸和木犀草苷对照品溶液重复测定6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD分别为0.83%和0.86%。结果表明，本实验精密度良好。
2.6 重现性试验
分别量取样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值，RSD值为0.75%，0.81%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.7 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2小时进样测定，供试品绿原酸和木犀草苷峰面积的RSD分别为0.71%和0.76%。结果表明样品溶液至少在2小时内稳定。
2.8 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的绿原酸和木犀草苷对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.3%和99.5%，RSD分别为0.86%和0.83%。
2.9 不同储存期金银花中2种药效组分的含量
3 讨论
分别考察乙腈-0.1%磷酸溶液（60：40），甲醇-0.1%磷酸（70：30），乙腈一水一甲酸（17：80：0.5），甲醇-0.1moloL-1磷酸二氢钾-三乙胺 （60∶40：0.01），甲醇-0.1moloL-1磷酸二氢钾-三乙胺 （50∶50：0.01），乙腈-0.1%磷酸溶液（50：50），5%冰乙酸-乙腈，线性梯度洗脱，乙腈-磷酸-0.1moloL-1磷酸二氢钾 （40∶0.01：60）不同比例的流动相，结果以5%冰乙酸-乙腈，线性梯度洗脱为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用5%冰乙酸-乙腈，线性梯度洗脱为流动相。金银花在储存过程中含量有所下降，但储存24个月的金银花还符合药典标准。
参考文献
[1]Lou Zaixiang，Wang Hongxin，Zhu Song，Ma Chaoyang，Wang Zhouping. Antibacterial activity and mechanism of action of chlorogenic acid. Journal of food science，2012.
[2]李惠香，张倩，柳亚男，刘攀，王丽莹，李丹娜，邱峰，赵烽.木犀草素与木犀草苷的抗炎活性对比研究[J].烟台大学学报（自然科学与工程版），2018（02）.
[3]管仁伟，曲永胜，顾正位，邵新，林慧彬，林建强.木犀草苷的药理作用研究[J].中国野生植物资源，2014（01）.
[4]张元元，李进，陈涛，李凤丽.高效液相色谱法同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量[J].天津中医药大学学报，2011（02）.
[5]李云贵，李冲，文翔昊，鲁启明，郭露.高效液相色谱测定小儿肺热咳喘口服液中绿原酸与木犀草苷的含量[J].中南医学科学杂志，2013（04）.
[6]舒翔，叶小春，陈军，刘敏，徐宏峰，林世和，谢岱，余南才，刘新国.高效液相色谱法同时测定夜香牛颗粒中绿原酸和木犀草苷的含量[J].中国医院药学杂志，2018（18）.