人IL—15cDNA的克隆及真核表达载体的构建

• 作 者: 谢云青 郑秋红
• 机 构: 福建省肿瘤医院肿瘤分子生物学研究室
• 出 处: 福建医药杂志
• 发表日期: 2000年6期
• 关键词: 人白细胞介素15 CDNA 克隆 真核表达 载体 HumanInterleukin15(hIL15)Reversetranscriptionpolymerase

目的 构建人白细胞介素－１５（ＩＬ－１５）ｃＤＮＡ真核表达载体，以期在哺乳类细胞中获得高效、稳定表达。方法 从外周血粘附性单核细胞（ＰＢＭＣ）中提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ方法获取了人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ，并与ｐｃＤＮＡ３．１质粒的ＥｃｏＲＩ和ＸｂａＩ位点定向连接，构建受控于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子的重组真核表达载体ｐｃＤＮＡ３１－ＩＬ－１５。结果 经ＰＣＲ扩增鉴定和ＤＮＡ序列分析，证明ＩＬ－１５已经正确插入克隆载体且序列正确。