【摘 要】
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目的 研究自噬在造影剂诱导足细胞氧化应激损伤中的作用.方法 培养的小鼠永生化足细胞共分为6组:(1)正常对照(Con)组;(2)造影剂(CM)组;(3)雷帕霉素(Rap)组;(4)造影剂加雷帕霉素(CM+Rap)组;(5)3-甲基腺嘌呤(3-MA)组;(6)造影剂加3-甲基腺嘌呤(CM+3-MA)组,予以相应的刺激2h.观察自噬增强剂雷帕霉素与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对造影剂诱导的足细胞氧化应激及
【机 构】
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430060,武汉大学人民医院肾内科;
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目的 研究自噬在造影剂诱导足细胞氧化应激损伤中的作用.方法 培养的小鼠永生化足细胞共分为6组:(1)正常对照(Con)组;(2)造影剂(CM)组;(3)雷帕霉素(Rap)组;(4)造影剂加雷帕霉素(CM+Rap)组;(5)3-甲基腺嘌呤(3-MA)组;(6)造影剂加3-甲基腺嘌呤(CM+3-MA)组,予以相应的刺激2h.观察自噬增强剂雷帕霉素与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对造影剂诱导的足细胞氧化应激及细胞活性的影响.West印迹检测各组足细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1及氧化应激相关蛋白Catalase、MnSOD的表达,丹酰戊二胺(MDC)染色检测足细胞内自噬体变化,采用氯甲基-2,7-二氯二氢荧光素二乙酯(CM-H2DCFDA)荧光染色检测足细胞内活性氧(ROS)水平,CCK8试剂盒检测细胞活性.结果 (1)造影剂抑制了足细胞内氧化应激相关蛋白Catalase、MnSOD的表达,促进了细胞内ROS的生成,导致足细胞活性下降(均P＜ 0.05);(2)3-MA共处理足细胞后,细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表达及自噬体生成均减少,氧化应激相关蛋白Catalase、MnSOD的表达进一步减少,ROS生成进一步增加,导致足细胞活性下降更加显著(均P＜ 0.05);(3)雷帕霉素共处理足细胞后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表达及自噬体生成增加,氧化应激相关蛋白Catalase、MnSOD的表达增强,ROS生成减少,促进了足细胞活性恢复(均P＜0.05).结论 自噬在造影剂诱导的足细胞氧化应激损伤起保护性作用,一定程度自噬上调可以减轻其氧化应激水平从而抑制足细胞损伤.
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