【摘 要】
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源自噬菌体P1的Cre重组酶可以识别34bp的靶DNA序列loxP,进行位点特异性的重组反应.为了简便地检测Cre酶在大肠杆菌中的重组活性,分别将cre基因和上下游带有loxP的绿色荧光蛋
【机 构】
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中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室,中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室,西北农林科技大学生命科学学院
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)
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源自噬菌体P1的Cre重组酶可以识别34bp的靶DNA序列loxP,进行位点特异性的重组反应.为了简便地检测Cre酶在大肠杆菌中的重组活性,分别将cre基因和上下游带有loxP的绿色荧光蛋白基因(gfp)克隆到具有不同抗性的两种不相容质粒中,然后将构建的原核表达载体pET30a-Cre和pET23b-loxGFP电击共转化大肠杆菌BL21(DE3),利用卡那霉素和氨苄青霉素双抗生素抗性进行筛选.通过直接观察转化子的绿色荧光,便可以显示Cre酶的体内重组活性,并进一步通过SDS-PAGE分析、质粒酶切鉴定进
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