【摘 要】
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[目的]筛选出微孢子Paranosema locustae感染条件下东亚飞蝗Locusta migratoria实时定量PCR最适内参基因.[方法]本研究应用实时荧光定量PCR技术测定东亚飞蝗甘油醛-3-磷酸脱
【机 构】
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新疆师范大学生命科学学院,中亚区域跨境有害生物联合控制国际研究中心,乌鲁木齐830054
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[目的]筛选出微孢子Paranosema locustae感染条件下东亚飞蝗Locusta migratoria实时定量PCR最适内参基因.[方法]本研究应用实时荧光定量PCR技术测定东亚飞蝗甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(Glyceralde-hyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、18s 核糖体RNA(18sRNA)、微管蛋白基因(Tubulin,TUB)、肌动蛋白基因(Actin,ACT)和延伸因子1 基因(Elongation factorl,EF1)5个候选基因在3个微孢子浓度(1 × 104、1 × 106和1 × 108个孢子/头)感染12 d后的表达稳定性;应用geNorm、Bestkeeper和Normfinder 3个软件综合分析5个内参基因的稳定性.[结果]geNorm软件对5个内参基因在不同微孢子虫浓度感染下稳定性分析结果表明:18S基因稳定性最低,平均表达稳定性值M值最高为0.658 4,TUB基因稳定性最高,M值最低为0.278 4.NormFinder软件分析在不同微孢子虫浓度感染下的5个内参基因的稳定值分别为0.152(EF1)、0.181(ACT)、0.212(TUB)、0.329(GAPDH)和0.395(18S),可知内参基因稳定性顺序为:EF1 ＞ACT＞ TUB＞GAPDH＞ 18S.由BestKeeper软件分析表明5个候选内参基因的SD值均小于1.0,表达均较稳定.根据其变异系数值Cv的大小可知,ACT基因最为稳定.[结论]综合3种软件分析结果,在不同微孢子虫浓度感染下,可选择的较为稳定的内参基因ACT、EF1和TUB基因作为相对定量的参照基因.
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