3＊ Flag-hPlk4真核表达载体的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达和定位

• 作 者: 沈涛 李妍 杨蕾 郭洲洋 巴根 郭然 陈之光 付勤
• 机 构: 中国医科大学附属盛京医院骨科,中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室
• 出 处: 现代肿瘤医学
• 发表日期: 2017年12期
• 关键词: hPlk4 WESTERN BLOT 免疫沉淀 骨肉瘤 hPlk4 Western blot immunoprecipitation osteosarco

目的：构建3＊ Flag-hPlk4真核表达载体,并证实重组表达载体在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法：以pGEX-4T-2-hPlk4为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk4基因c DNA全长,并将其克隆至含有3＊ Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组载体进行双酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,Western blot检测重组蛋白的表达。同时利用共聚焦激光显微镜观察3＊ Flag-hPlk4表达载体在U2OS细胞中的定位,进一步利用免疫沉淀的方法纯化人源Plk4蛋白。结果：hPlk4