【摘 要】
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目的 构建针对P27的siRNA腺病毒载体及相应的对照病毒载体,并鉴定重组腺病毒在小鼠胰岛中对内源性p27基因表达的影响.方法 合成针对p27的siRNA的靶DNA序列及相应的阴性对照序
【机 构】
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南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室
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目的 构建针对P27的siRNA腺病毒载体及相应的对照病毒载体,并鉴定重组腺病毒在小鼠胰岛中对内源性p27基因表达的影响.方法 合成针对p27的siRNA的靶DNA序列及相应的阴性对照序列,连接至pShuttle-H1质粒中,然后用Not Ⅰ和Hind Ⅲ限制性内切酶将H1-siRNA片段从pShuttle-H1-siRNA质粒上双酶切下来,克隆至空载pAdTrack穿梭质粒上,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,转染QBI-293A细胞,包装得到pAd-P27-siRNA和pAd-NC重组腺病毒.用病毒体外感染小鼠胰岛,Western印迹法检测P27蛋白表达水平.结果 重组腺病毒载体经测序鉴定正确,制备的病毒感染效率高,能有效抑制小鼠胰岛中P27的表达.结论 成功构建了针对P27的siRNA重组腺病毒载体,为进一步研究P27在胰岛β细胞生长中的作用提供了基础.
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