【摘 要】
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目的研究嗅鞘细胞培养液(OECCM)对海仁藻酸(KA)损伤后原代培养脊髓神经元的作用,进一步探讨其保护的作用机理.方法采用原代细胞培养法,分别培养了胚胎小鼠脊髓神经元和成年大
【机 构】
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710032,西安,第四军医大学全军神经科学研究所
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目的研究嗅鞘细胞培养液(OECCM)对海仁藻酸(KA)损伤后原代培养脊髓神经元的作用,进一步探讨其保护的作用机理.方法采用原代细胞培养法,分别培养了胚胎小鼠脊髓神经元和成年大鼠的嗅神经鞘细胞(OECs),收集OECCM.通过给予KA建立体外的损伤模型,KA分别作用6,8,12 h后,加入OECCM继续培养24～36 h.然后进行抗神经元型一氧化氮合酶(ncNOS)免疫细胞化学染色,观察细胞ncNOS表达情况,并对各组ncNOS阳性神经元数目进行统计,同时运用四唑盐(MTT)比色法检测神经细胞活性;最后对不同组的一氧化氮合酶(NOS)阳性细胞染色情况、阳性细胞数目和细胞活性进行比较.结果KA作用后,一氧化氮(NO)都出现异常表达,但与实验组(OECCM干预组)相比,OECCM处理组NO表达水平明显低于单纯KA损伤组.OECCM处理组NOS阳性细胞数目(6 h组,34.3±5.25;8 h组,40.6±3.68),明显低于对照组(6 h组,42.3±3.48;8 h组,54.5±6.30)(P＜0.01),在KA损伤12 h时,两组NOS阳性细胞数(52.3±5.23 vs 61.32±6.45)(P＜0.05);而细胞活性(6h,0.372±0.034;8 h,0.312±0.026)明显高于对照组(6 h,0.283±0.041;8 h,0.219±0.033)(P＜0.01),12 h时两组细胞活性没有明显差异(0.199±0.012 vs 0.202±0.032)(P＞0.05). 结论OECCM中可能含有一些保护脊髓神经元免遭KA损伤的因子,这些因子可能在参与抑制NOS异常表达起了重要作用.
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