【摘 要】
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目的 本研究通过体外及体内实验揭示lncRNA SNHG 16在宫颈癌发展中的作用及其分子机制,以确证lncRNA SNHG16为介导宫颈癌恶性发展关键的致病分子.方法 采用CCK8法和克隆形成实验检测lncRNA SNHG16对宫颈癌细胞增殖的影响;划痕法和Transwell法检测lncRNA SNHG16对宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响;Annexin V/7-AAD法检测沉默lncRNA SNHG16对宫颈癌细胞凋亡的影响;裸鼠成瘤实验检测lncRNA SNHG16对体内宫颈癌肿瘤生长的影响;实时荧光定
【机 构】
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新疆医科大学附属肿瘤医院,新疆乌鲁木齐 830011
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目的 本研究通过体外及体内实验揭示lncRNA SNHG 16在宫颈癌发展中的作用及其分子机制,以确证lncRNA SNHG16为介导宫颈癌恶性发展关键的致病分子.方法 采用CCK8法和克隆形成实验检测lncRNA SNHG16对宫颈癌细胞增殖的影响;划痕法和Transwell法检测lncRNA SNHG16对宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响;Annexin V/7-AAD法检测沉默lncRNA SNHG16对宫颈癌细胞凋亡的影响;裸鼠成瘤实验检测lncRNA SNHG16对体内宫颈癌肿瘤生长的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测宫颈癌组织、正常宫颈组织以及宫颈癌细胞中PARP9 mRNA的表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测SNHG 16与PARP9基因启动子活性的关系;RIP法检测SNHG16与SPI1蛋白的结合;ChIP法检测SPIl与PARP9基因启动子的结合;CCK8法检测PARP9在宫颈癌细胞增殖中的作用;Transwell法检测PARP9在宫颈癌细胞侵袭中的作用.Western blotting检测PARP9、Ki67、PCNA、E-cadherin、Vimentin、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白的表达.结果 与正常宫颈上皮细胞HcerEpic相比,宫颈癌细胞CaSki、C33a、ME180、HeLa中lncRNA SNHG 16表达明显上调(P＜0.05);沉默lncRNA SNHG16后,C33a和HeLa细胞的增殖能力明显减弱(P＜0.05);沉默lncRNA SNHG 16后,C33a细胞的迁移能力明显减弱(P＜0.05),而HeLa细胞的迁移能力不受影响;沉默lncRNA SNHG16后,C33a和HeLa细胞的侵袭能力明显减弱;沉默lncRNA SNHG16后,C33a和HeLa细胞的凋亡水平明显增加;在体内实验中,沉默lncRNA SNHG16能明显抑制肿瘤生长(P＜0.05);与HcerEpic细胞相比,HeLa细胞中PARP9表达明显增加(P＜0.05);lncRNA SNHG16增强PARP9基因启动子活性(P＜0.05);lncRNA SNHG16与SPI1蛋白结合;SPI1与PARP9基因启动子结合;lncRNA SNHG16沉默后,HeLa细胞中PARP9基因启动子的活性被明显抑制,且PARP9 mRNA和蛋白表达水平显著减少(P＜0.05);lncRNA SNHG16沉默后,HeLa细胞的增殖和侵袭能力明显减弱,但同时过表达PARP9可恢复其增殖和侵袭能力(P＜0.05).结论 lncRNA SNHG16在宫颈癌细胞中高表达;沉默lncRNA SNHG16可明显抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而促进宫颈癌细胞凋亡,并抑制宫颈癌肿瘤的生长;lncRNA SNHG16作为致病分子,通过激活SPI1调控的PARP9基因转录而介导宫颈癌细胞的恶性增殖和侵袭,最终促进宫颈癌的恶性发展.
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