【摘 要】
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目的: 真核表达抗CD3单链抗体(scFv), 并研究其生物学活性.方法: 将编码抗CD3 scFv的DNA片段插入真核表达载体pDisplay中. 对所构建重组表达载体进行测序确认后, 以电穿孔法
【机 构】
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西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所,陕西,西安,710061
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目的: 真核表达抗CD3单链抗体(scFv), 并研究其生物学活性.方法: 将编码抗CD3 scFv的DNA片段插入真核表达载体pDisplay中. 对所构建重组表达载体进行测序确认后, 以电穿孔法将重组质粒导入Hela细胞, 以原位杂交法检测抗CD3 scFv的表达, 以3H TdR 掺入法检测其在体外对T细胞的活化作用, 以MTT比色法观察转染的Hela细胞与T细胞混合培养后, 诱发的细胞毒性T细胞的杀伤作用.结果: 成功地构建了抗CD3 scFv的真核表达载体, 并在Hela细胞中获得表达.所分泌的抗CD3 scFv在抗CD28 mAb存在的条件下, 能够刺激T细胞活化.将转染的Hela细胞与T细胞混合培养能够诱发CTL的杀伤作用.结论: 真核表达的抗CD3 scFv具有刺激T细胞活化的活性, 可用于构建对肿瘤进行免疫治疗的双功能分子.
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